Dor neuropática após lesão medular traumática: o papel dos receptores endotelinérgicos ETA e ETB

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015.Lesões medulares traumáticas resultam em um dano neurológico que, geralmente, resulta em dor neuropática, a qual impacta negativamente a qualidade de vida dos lesados medulares. As endotelinas são peptídeos que exercem seus efeitos através dos receptores ETA (ETAR) e ETB (ETBR) e, contribuem para alterações sensoriais associadas aos processos inflamatórios e dores neuropáticas. No entanto, o envolvimento desses receptores na dor neuropática após trauma medular precisa ser elucidado. Ratos Wistar machos foram submetidos a lesão medular traumática no nível torácico T10 por compressão através de catéter Fogarty-2F. As avaliações comportamentais e coletas de amostras foram realizadas em 2, 7, 14, 21 e 28 dias após o procedimento cirúrgico. Os níveis de expressão dos receptores ETA e ETB foram mensurados através de western blot e imunohistoquímica, e seus correpondentes níveis de RNAm avaliados por PCR-em tempo real. Além de avaliações funcionais pela escala BBB e comportamentais através de filamentos de von Frey e avaliação de sensibilidade térmica por aparato de Hargreave s nas patas anteriores e posteriores . No dia 28 o escore BBB destes animais foi de 4 pontos, que se caracteriza por movimento discreto das três articulações  quadril, joelho e tornozelo. No entanto, os animais lesados medulares tiveram um aumento significativo em comparação ao grupo falso-operado nas respostas ao estímulo mecânico das patas posteriores, tanto com o filamento de 4 gramas quanto com o de 15 gramas. Essas alterações de sensibilidade foram significantes entre os dia 14 e 28 após o procedimento cirúrgico. O dano medular resultou no desenvolvimento de hiperalgesia nos membros posteriores a partir do 14o dia após a lesão medular, redução na sensibilidade térmica a partir do 7o dia, um aumento nos níveis de RNAm para ETAR e ETBR, além de um aumento na expressão da proteína do receptor ETA na medula espinhal. Observou-se, também, um aumento da expresão de ETAR na substância cinzenta da medula espinhal de animais lesados medulares no 14 dias após o trauma. O tratamento no 21o dia após a lesão medular com antagonista peptídico de ETAR, BQ-123 (40 e 90 pmol, i.t.) e tratamento com o antagonista dual para ETAR e ETBR, bosentan (30 and 100 mg/kg, oralmente) foram capazes de reduzir significativamente a hiperalgesia por algumas horas após o tratamento, no entanto o tratamento com o antagonista seletivo para ETBR, BQ-788 (20 e 90 pmol, i.t), foi ineficaz na redução da hiperalgesia. Assim, esse estudo demonstra que há uma participação de ETAR e ETBR, na dor neuropática decorrente do trauma medular, em especial do ETAR e estes resultadados podem contribuir para o desenvolvimento de novas terapias para o tratamento desta importante comorbidade dos lesados medulares.Abstract : Traumatic spinal cord injury (SCI) is a devastating neurologic disorder that often inflicts neuropathic pain, which further impacts negatively on the patient s quality of life. Endothelin peptides, which exert their effects via endothelin A (ETAR) and endothelin B (ETBR) receptors, can contribute to sensory changes associated with inflammatory and neuropathic pain, but their role in nociception following SCI is unknown. At different time points (2, 7, 14, 21 and 28 d) after subjecting male Wistar rats to surgery for compression-induced T10 level SCI, the spinal cord levels of ETAR and ETBR were assessed by Western blot and immunohistochemistry, and the corresponding mRNAs by real-time PCR, alongside recordings of locomotor behaviour by BBB scale and behavioral responses to mechanical and thermal stimulation of the forepaws and hind paws with von Frey hairs. Animal subjected to SCI ended the 28th time-period with a score of 4 within the BBB scale, which represents slight movements of the hip, knee and ankle. SCI was associated with development of hind paw mechanical hyperalgesia from day 14 onwards and heat hyperalgesia from day 7 to day 21, and up-regulation of ETAR and ETBR mRNA in the spinal cord and of ETAR protein in the spinal cord. SCI increased ETAR protein expression in spinal grey matter on the 14th day after injury. Treatment on day 21 after surgery with the ETAR selective antagonist BQ-123 (40 and 90 pmol, i.t.) or the dual ETAR/ETBR antagonist bosentan (30 and 100 mg/kg, orally) transiently reduced SCI-induced mechanical hyperalgesia, but the ETBR antagonist BQ-788 (20 and 90 pmol, i.t.) was ineffective. Conclusions. Altogether, these data show that SCI upregulates ETAR expression in the spinal cord, which appears to contribute to the hind paw mechanical hyperalgesia associated with this condition. Therapies directed towards blockade of spinal ETAR may hold potential to limit SCI-induced neuropathic pain