Estudo genotípico de Cryptococcus neoformans isolados de amostras ambientais no Município de Florianópolis, Santa Catarina.

TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia.Cryptococcus neoformans é um fungo leveduriforme capsulado de distribuição cosmopolita causador da Criptococose. No meio ambiente o fungo é encontrado principalmente em excretas de aves. Através das diferenças encontradas na estrutura do polissacarídeo componente da cápsula são identificados cinco sorotipos dessa levedura (A, B, C, D e AD). A infecção humana ocorre através da inalação de propágulos de origem sexual presentes no ambiente. Considerando a prevalência do C. neoformans em excretas de aves, a presença de pombos em áreas urbanas é um fator de grande relevância em saúde pública para ocorrência da infecção. No presente trabalho, foram realizadas coletas de excretas de pombos em diferentes locais da região central de Florianópolis. O material coletado foi semeado em placas de Petri contendo meio Ágar Niger (Guizotia abyssinica) e cultivado a 30°C. As placas foram examinadas diariamente num intervalo de 15 dias. Colônias com características macroscópicas de C. neoformans foram transferidas para tubos de cultura contendo caldo CG e cultivadas a 37°C por 24 a 48 horas. A identificação das amostras isoladas foi realizada através observação microscópica em preparações a fresco coradas pela tinta da China e pela amplificação do fragmento do gene CAP59 através da PCR. Das 40 amostras de excreta de pombo coletadas foram isoladas quatro amostras do fungo. A amplificação do DNA das quatro amostras isoladas mostrou a presença do produto amplificado esperado de 597pb. A metodologia de PCR-RFLP utilizando as endonucleases de restrição AvaII e HaeIII foi utilizada para identificação do sorotipo e a metodologia de RAPD foi utilizada para estudo da variabilidade genética dos isolados. Todos os quatro isolados apresentaram o mesmo perfil de restrição do padrão sorotipo A. A caracterização das amostras agrupou os quatro isolados em três grupos geneticamente distintos. Estes resultados mostram que embora pertencentes ao mesmo sorotipo, através de RAPD foi possível observar uma grande variabilidade genética, com a formação de grupos distintos das amostras utilizadas como padrões dos sorotipos do fungo