Efeito do ácido fólico e da homocisteína sobre os processos de proliferação e diferenciação celular no telencéfalo de embriões de Gallus domesticus

TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia.Micronutrientes são vitaminas e minerais obtidos da dieta, necessários para o crescimento, manutenção e reprodução dos indivíduos. O ácido fólico (AF) é uma vitamina do complexo B, que participa de importantes reações metabólicas, como a biossíntese de compostos essenciais. Sua deficiência está associada a elevados índices plasmáticos de homocisteína (Hcy), que ao se acumular intracelularmente, pode provocar defeitos de tubo neural (DTN). Neste estudo foi avaliado o efeito do AF e da Hcy sobre os processos de proliferação e diferenciação celular no telencéfalo de embriões de gallus domesticus. Para tal, ovos fertilizados de G. domesticus foram incubados a 38°C e a 65% de umidade, sendo os tratamentos realizados após 24 e 46 horas de incubação. Foram organizados grupos experimentais, como segue: controle - 50 μl salina (24 horas de incubação)+50 μl salina (46 horas de incubação); AF - 50 μl salina (24 horas de incubação)+0.5 μg AF (46 horas de incubação); Hcy - 50 μl salina (24 horas de incubação)+20 μmol Hcy (46 horas de incubação); AF+Hcy - 0.5 μg AF (24 horas de incubação)+20 μmol Hcy (46 horas de incubação). Após, os ovos foram selados com fita não tóxica e retornaram para a estufa, permanecendo até o sexto dia embrionário (E6), quando os embriões foram retirados dos ovos e preparados para as análises posteriores. Foram realizadas análises morfométricas das vesículas encefálicas e das camadas do telencéfalo (ependimária, manto e marginal). Técnicas de imuno-histoquímica foram utilizadas para avaliar a proliferação celular, diferenciação neuronal e glial, através dos anticorpos: anti-fosfohistona H3 (proliferação celular); anti–β tubulina III (diferenciação neuronal) e anti-GFAP (diferenciação glial). A morfometria da região cefálica demonstrou pouca variação entre os tratamentos realizados. Do mesmo modo, não foram observadas alterações na espessura das camadas do telencéfalo. Nos embriões tratados com Hcy verificou-se uma redução significativa da proliferação celular na camada ependimária. Na diferenciação neuronal, a Hcy interferiu na diferenciação dos neurônios, interferindo também na migração neuronal. Adicionalmente, verificou-se que o tratamento com Hcy interferiu na diferenciação dos astrócitos, aumentando sua expressão, conduzindo a uma resposta conhecida como gliose reativa. Os resultados demonstram que, embora a Hcy não tenha comprometido o crescimento das vesículas encefálicas e das camadas celulares do telencéfalo, induziu alterações nos processos de proliferação celular e de diferenciação neuronal e glial em G. domesticus.Micronutrients are vitamins and minerals obtained from the diet required for growth, maintenance and reproduction of individuals. Folic acid (FA) is an B vitamin that participates in important metabolic reactions, such as the biosynthesis of essential compounds. FA nutritional deficiency produces an increase in homocysteine (Hcy) levels, and can cause neural tube defects (DTN). In this study we evaluated the effect of FA and Hcy in processes of cell proliferation and differentiation in the telencephalon of embryos of Gallus domesticus. Fertilized eggs of G. domesticus were incubated at 38 ° C and 65% humidity, and treatments were performed after 24 and 46 hours of incubation. The experimental groups were organized as follows: control - 50 μl saline (24 hours incubation) + 50 μl saline (46 hours incubation); AF- 50 μl saline (24 hours incubation) + 0.5 μg AF (46 hours incubation); Hcy- 50 μl salina (24 hours incubation) + 20 μmol Hcy (46 hours incubation); AF+Hcy - 0.5 μg AF (24 hours incubation) + 20 μmol Hcy (46 hours incubation. After, the egg’s was sealed with non-toxic tape and returned to the incubator until the sixth embryonic day (E6). Thus the embryos were removed from eggs and prepared for further analysis. Morphometry of head and layers of telencephalon were performed. Immunohistochemistry were used to evaluate the cell proliferation, differentiation, neuronal and glial cell using the antibodie: anti-phosphohistona H3 (cell proliferation), anti-β tubulin III (neuronal differentiation) and anti-GFAP (glial differentiation). The morphology of cephalic region showed little variation among the treatments. Similarly, no changes were observed in the thickness of the layers of the telencephalon. Embryos treated with Hcy showed a significant reduction in cell proliferation in ependymal layer. Hcy caused disruptions in neuronal differentiation and migration. Additionally, it was found that treatment with Hcy interfer with the differentiation of astrocytes, increasing GFAP expression, leading to an astrocytic response known as reactive gliosis. These results demonstrate that, although Hcy has not compromised growth and brain vesicles layers of the telencephalon, induced significant changes in the processes of cell proliferation and in the differentiation of the neurons and glia in G. domesticus embryos