Efeito do canabidiol sobre a reconsolidação da memória de medo ao contexto: envolvimento dos receptores CB1 do córtex pré-límbico

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2014.A busca por drogas que prejudicam a reconsolidação de memórias traumáticas pode ter um impacto clínico bastante importante. O canabidiol (CBD) é o principal componente da Cannabis sativa desprovido de efeitos psicotomiméticos e seguro para o uso em animais de laboratório e em humanos. Considerando que o CBD atenua a expressão da ansiedade e facilita o processo de extinção de memórias aversivas, o objetivo do presente trabalho foi investigar em ratos se ele também interfere com a reconsolidação de uma memória de medo condicionada ao contexto, bem como avaliar a participação do córtex pré-frontal medial (CPFm) no processo de reconsolidação e nos efeitos sistêmicos do CBD. Para tanto, imediatamente após a evocação da memória de ratos previamente condicionados, o CBD foi administrado (3 ? 30 mg/kg). Foi observado, uma redução na porcentagem de congelamento até 22 dias após o tratamento com a dose de 10 mg/kg. Não ocorreu reinstalação da memória, e o mesmo efeito foi observado quando testado em uma memória mais velha (7 dias), foi bloqueado pelo antagonista dos receptores canabinoides do tipo 1 (AM251 1 mg/kg; CB1), mas não pelo antagonista dos receptores de serotonina do tipo 5-HT1A (WAY 0,1 mg/kg), e não foi evidente quando a evocação da memória foi omitida. Tais resultados indicam que o CBD prejudica a reconsolidação de uma memória aversiva, um efeito dependente da ativação indireta do sistema endocanabinoide. Uma hora após a evocação da memória, foi observado um aumento na expressão da proteína Zif268 no CPFm, principalmente nas subdivisões do córtex cingulado (CC) e pré-límbico (PL), mas não no infralímbico (IL). Esse aumento não foi observado quando a memória não foi evocada e foi atenuado com a administração de CBD. Esse conjunto de resultados sugere que o CC participa da reconsolidação, indicando também um papel para o PL nesse fenômeno. Para confirmar o papel do córtex PL na reconsolidação, essa estrutura foi inativada imediatamente após a evocação da memória de 1, 7 e 21 dias. Em todos os casos, foi observada, uma redução na porcentagem de congelamento quando os animais foram retestados no dia seguinte. Novamente, esse efeito foi duradouro e não sofreu reinstalação, confirmando que a atividade do córtex PL é importante para essa etapa de re-estabilização da memória. Quando o CBD foi administrado sistemicamente, o bloqueio dos receptores CB1 com AM251 (50 pmol/0.2 µL) no córtex PL preveniu o efeito amnéstico. A inibição da FAAH pelo URB597 (200 pmol/0,2 µL)administrado diretamente no córtex PL imediatamente após a evocação da memória, também prejudica a reconsolidação. Em conjunto, esses resultados confirmam a participação do córtex PL na reconsolidação de uma memória de medo e demonstram que os receptores CB1 dessa área são recrutados pelo CBD quando ele prejudica a reconsolidação.Abstract : The search for reconsolidation blockers may uncover clinically relevant drugs to disrupt memories of significant stressful life experiences. In this sense, cannabidiol (CBD), the major non-psychotomimetic component of Cannabis and a compound safe to be used in rodents and in humans, might be relevant. Based on the fact that CBD facilitates fear extinction and is anxiolityc, and on the evidence that many CBD effects are mediated by the medial prefrontal cortex activity (mPFC), the aim of the present study was to evaluate whether the systemic injection of CBD in rats, could mitigate an established contextual fear memory, by blocking its reconsolidation, evaluating the role of mPFC in this step of memory processing and in the CBD effects. CBD (3 ? 30 mg/kg) was administered immediately after fear memory retrieval in rats previously conditioned. It was observed a reduction in the percentage of freezing time until 22 days after the treatment, with the most effective dose (10 mg/kg). This effect was not accompanied by fear memory reinstatement, it was seen when tested in an older memory (7 days old), it could be blocked by the cannabinoid receptor CB1 antagonist AM251 (1 mg/kg), but not by the serotonin receptor 5-HT1A antagonist WAY100635 (0.1 mg/kg), suggesting that CBD disrupts fear memory reconsolidation by the endocannabinoid system. One hour after retrieval, it was observed an increase in Zif268 expression in the mPFC, mainly in its cingulate (CC) and prelimbic (PL) parts, but not in infralimbic (IL). When memory retrieval was omitted, the Zif268 expression was not seen and the CBD systemic administration prevented the expression in CC and PL. These results confirm the CC role in reconsolidation and suggest a role for PL cortex. To confirm the role of PL cortex in fear memory reconsolidation, this structure was temporarily inactivated with muscimol (4.0 nmol/0.2 µL) immediately after retrieval of different memory ages (1, 7 and 21 days old). In all cases, a reduction in the percentage of freezing time was observed one day later. This effect was long lasting and did not present reinstatement, confirming that PL cortex activity subserves fear memory reconsolidation. When the CBD was administered systemically, the blockade of CB1 receptors with AM251 (50 pmol/0.2 µL) in PL cortex prevented the CBD effect in fear memory reconsolidation. The inhibition of FAAH by URB597 injected bilaterally into the PL cortex (200 pmol/0.2 µL) immediately after fear memory retrieval also impaired its reconsolidation. Altogether, the results confirm that theactivity of PL cortex subserves fear memory reconsolidation, acting as a neural substrate to the CBD effects