Biosynthesis of therapeutic DNA plasmid using agri-food subproducts media

Increased relevance of biomedical applications of plasmid DNA (pDNA) to induce therapeutic effects has having a great impact on industry and biopharmaceutical research. Gene therapy and DNA vaccines are a new approach for treating genetic diseases such as cancer. These new therapies are based on delivery systems of drugs based on nucleic acids that act at the level of the target cell, correcting or deleting the affected cells. Escherichia coli (E. coli) is the most used host system in the production of pDNA, due to their high growth in minimal media and its easy genetic manipulation. In this paper we used E. coli VH35, a variant with genetic modifications that minimize the accumulation of acetate. Several studies have been performed in different steps of production and purification of plasmid DNA into E. coli in order to increase the yield and productivity of this biomolecule. However, despite several optimization achieved, commercial substrates are used as culture media to produce this biomolecule, taking into account that the final yield of pDNA make the whole production process quite expensive. In order to overcome this problem, the commercial substrates may be supplemented or replaced by industrial wastes resulting in a pDNA yield very similar compared to commercial substrates, via a more economical process. In this paper we used the CSL ("corn step liquor") and the CWPS ("Cheese whey power solution") as alternative substrates in culture media for production of pDNA in E. coli.O aumento da relevância da aplicabilidade biomédica do DNA plasmídico (pDNA) para induzir efeitos terapêuticos tem tido um grande impacto na indústria e pesquisa biofarmacêutica. A terapia génica e as vacinas de DNA são uma nova abordagem no tratamento de doenças genéticas, como o cancro. Estas novas terapêuticas têm por base a entrega de fármacos baseados em ácidos nucleicos, que atuam ao nível das células alvo, corrigindo ou destruindo as células afetadas. A Escherichia coli (E. coli) é o sistema hospedeiro mais utilizado na produção de pDNA, dado o seu elevado crescimento em meios mínimos e a sua fácil manipulação genética. No presente trabalho é utilizada a E. coli VH35, uma variante com modificações genéticas que minimizam a acumulação de acetato. Diversos estudos têm sido efetuados nas diferentes etapas de produção e purificação de DNA plasmídico em E. coli, com a finalidade de aumentar o rendimento e produtividade final desta biomolécula. No entanto, apesar de diversas otimizações alcançadas, os substratos comerciais utilizados como meios de cultura para produzir esta biomolécula, tendo em conta o rendimento final, tornam todo o processo de produção de pDNA bastante dispendioso. De modo a superar este problema, os substratos comerciais podem ser suplementados ou substituídos por excedentes industriais, obtendo-se uma produtividade de pDNA bastante semelhante comparativamente aos substratos comerciais, através de um processo muito mais económico. No presente trabalho é utilizado o CSL (“corn step liquor”) e o CWPS (“Cheese whey poder solution”) como substratos alternativos em meios de cultura para a produção de pDNA em E. coli