Development and implementation of new protocols for antibody purification

Com uma sociedade em constante desenvolvimento e crescimento, o ser humano procura novos meios para prolongar o seu tempo de vida. Como tal, e com o objectivo de alcançar a manutenção da saúde pública, é necessário desenvolver e prescrever terapias correctas, sendo imprescindível possuir testes de diagnóstico céleres e com limites de detecção eficazes, que veiculem uma informação fidedigna ao clínico. Assim, os anticorpos, como biomolécula que apresenta uma elevada afinidade para o antigénio, são um ponto de interesse para aplicações tanto a nível terapêutico como para testes de diagnóstico. Após a sua produção, recorrendo a tecnologia recombinante, o processo de recuperação das imunoglobulinas (Igs) envolve vários passos de filtração, inactivação viral, bem como a aplicação de diversas técnicas cromatográficas. O produto é assim submetido a várias técnicas, correndo o risco de haver a introdução de novos contaminantes e perdas durante o processo de manipulação do mesmo. Deste modo, torna-se essencial investigar, desenvolver e optimizar processos de produção, fragmentação, purificação e redução de anticorpos, que permitam uma recuperação do produto mantendo as suas características morfológicas e funcionais, a um custo aceitável. Este projecto tem como objectivo, estudar novos métodos de purificação de diferentes anticorpos e fragmentos de anticorpos para posterior utilização em testes de diagnóstico. Recorrendo à técnica de cromatografia de exclusão molecular, pretende-se purificar os fragmentos de ligação ao anticorpo F(ab)’2 e F(ab)’, que posteriormente serão imobilizados na superfície do biosensor.With a society in constant development and grow, the human being search for new ways to prolong their half life time. As such, and with the goal to achieve the maintenance of the public health, is necessary to develop and prescribe correct treatments, being indispensable hold fast tests of diagnosis with a efficient limit of detection, that convey a reliable information to the clinic. So, the antibodies, as a biomolecule which presents a high affinity to the antigen, constitute a point of interest to therapeutic and diagnosis applications. Behind the production, which resorts to recombinant technology, the process of recovery of immunoglobulin’s (Igs) involves several filtration steps, viral inactivation, as well as the application of multiple chromatography techniques. The product is therefore subject to several techniques and the risk of the introduction new contaminants and product loss during the manipulation increases. Thus, becomes essential to explore, to develop and to optimize the processes of production, fragmentation, purification and reduction of antibodies, that allow a product recovery that keep the morphologic and functional characteristics of the product, in a acceptable cost. This project has as goal, the study of new purification methods to different antibodies, and antibody fragments to ulterior application in diagnosis test. Using exclusion molecular chromatography, we intended to purify the fragments of antigen binding F(ab)’2 and F(ab)’, for ulterior immobilization over the biosensor surface