Avaliação in vitro da actividade antifúngica da nitroglicerina e da lidocaína, isoladas e em associação

Objetivo: Diversos obstáculos vão surgindo no percurso da amamentação natural, precipitando uma perceção de insuficiente valor nutritivo do leite e levando ao abandono precoce do aleitamento materno. A dor mamilar é a segunda principal causa do desmame precoce. Na literatura é apontada uma relação entre fissuras mamilares e infeção causada pelo fungo Candida, sendo que os compostos disponíveis no mercado farmacêutico para o seu tratamento apresentam reduzida eficácia. A associação de dinitrato de isossorbida, lidocaína e rutosídios, foi usada na forma de creme com base antissética para o tratamento de fissuras anais agudas e crónicas. Já faz parte do leque terapêutico uma pomada de nitroglicerina para o mesmo efeito. Nesta dissertação pretende-se testar in vitro o potencial efeito anti-Candida das soluções de Lidocaína e de Nitroglicerina, isoladamente e em conjunto, de forma a avaliar a aplicabilidade do seu uso no tratamento de infeções mucocutâneas por Candida spp, nomeadamente nas fissuras mamilares. Materiais e Métodos: Foram testadas 10 estirpes de Candida. 1 estirpe de C. albicans de coleção (American Type Culture Collection strain), e 9 estirpes clínicas: 4 C.albicans, 1 C. parapsilosis, 1 C. krusei, 2 C. glabrata e 1 C. tropicalis. As estirpes clínicas foram isoladas de infeções mucocutâneas. A atividade anti-Candida dos compostos testados foi verificada por determinação da concentração mínima inibitória e da concentração mínima letal. Para a determinação da CMI foi adotado o protocolo do micrométodo descrito na norma CLSI M27-A3. O efeito da associação dos dois fármacos foi estudado em relação a C. albicans ATCC 10231 com base no protocolo do Checkboard descrito por Vitale et al. O mecanismo de ação dos fármacos estudados foi avaliado por citometria de fluxo, com base no procedimento descrito por Pina-Vaz et al. Resultados: Os dois fármacos testados revelaram atividade antifúngica em Candida spp, apresentando variações de CMI entre 10 e 20mg/mL para a Lidocaína e 0.15 e 0.30mg/mL para a Nitroglicerina. Verificou-se morte celular (CML) para a Lidocaína entre as concentrações 15 e 30mg/mL, variando para a Nitroglicerina entre 0,15 e 1,25mg/ml. A avaliação do efeito antifúngico em C. albicans da combinação das duas moléculas, com base na técnica do checkboard, demonstrou redução de uma diluição da CMI relativamente às concentrações dos compostos isolados. Por citometria de fluxo verificou-se que o tratamento de C. albicans ATCC 10231 com concentrações equivalentes a 1/2 CMI, CMI e 2CMI de ambos os fármacos, não induziu a entrada do IP, permanecendo as células não marcadas. Conclusões: Podemos concluir que aos reconhecidos efeitos terapêuticos descritos para cada um dos compostos estudados, se junta a sua concludente atividade anti-Candida. A combinação das duas drogas numa formulação galénica adequada parece promissora para tratamento das fissurações mamilares pelos efeitos individuais de cada um dos fármacos mas também na perspetiva do controlo da infeção, visto se ter verificado um efeito aditivo na conjugação das duas moléculas.Objective: Several obstacles arise during breastfeeding precipitating a perception of poor nutritional value of milk and leading to early weaning. Nipple pain is the second most common reason for early weaning. The literature points out to a relationship between cracked nipples and Candida infection. Products available in the pharmaceutical market present low effect on the management of the referred infection. Recently the association of isosorbide dinitrates, lidocaine and rutosides has been used as an antiseptic cream, proved to be effective for the treatment of acute and chronic anal fissure. There already exists a nitroglycerin ointment to treat the same problem. In this work we tested the potential anti-Candida activity of Lidocaine and Nitroglycerin solution for the treatment of nipple cracks. Study design: Ten strains of Candida were studied: 1 C. albicans from collection (American Type Culture Collection strain) and 9 clinical strains: 4 C. albicans, 1 C. parapsilosis, 1 C. krusei, 2 C. glabrata and 1 C. tropicalis. Clinical strains were isolated from mucocutaneous candidosis cases. The anti-Candida activity of both compounds was verified by determination of MIC and MLC. To determine the MIC, it was adopted the micromethod according to CLSI reference M27-A3 protocol. The association of both drugs was studied upon C. albicans ATCC 10231 based on Checkboard protocol described by Vitale et al. Their possible mechanism of action was investigated by flow cytometry, using the procedure described by Pina-Vaz et al. Results: Both tested drugs inhibited the growth of all Candida strains, with MICs ranging from 10 to 20 mg/mL for Lidocaine and from 0,15 to 0,30mg/mL for Nitroglycerin. Cell death (MLC), was confirmed for Lidocaine between 15 and 30mg/mL, ranging from 0,15 to 1,25mg/mL for Nitroglycerin. Evaluation of antifungal effect related to C. albicans with the combination of both drugs, based on the checkboard technique, found a reduction of one dilution of MIC comparatively to the isolated drugs concentrations. Flow citometry showed that the treatment of C. albicans ATCC 10231 with concentrations equivalent to half of MIC, MIC and twice MIC of both drugs, not induced entry of PI, leaving the cells unmarked. Conclusions: The combination of Lidocaine with Nitroglycerin in an adequate galenic formulation seems promising to treat nipple fissures on behalf of their individual recognized therapeutic effects, now added with an evident in vitro anti-Candida activity