L'intégration d'une molécule d'ADN, contenant des séquences hautement répétitives, dans le génome de cellules de rat

Nous avons voulu vérifier s'il était possible, dans les cellules somatiques, de diriger l'intégration d'une molécule de DNA au niveau d'un site cellulaire homologue. Nous avons transféré, dans des cellules de rat, une molécule d'ADN recombinant (Rml), contenant un génome complet du virus du polyome associé à des séquences cellulaires hautement répétitives et polydispersées. Nous avons isolé des foyers de cellules transformées et nous avons fait l'analyse des insertions de Rml présentes dans les génomes de ces cellules. Dans le clone 11.6, un des crossing-over ayant conduit à l'intégration de Rml, a fait intervenir une région de cette molécule contenant des séquences répétitives. L'analyse de ce crossing-over allait nous permettre de vérifier si l'homologie peut jouer un rôle dans les mécanismes de recombinaison intervenant lors de l'intégration d'ADN exogène dans le génome de cellules animales. Nous avons cloné une partie du site d'intégration du clone 11.6, comprenant la jonction ""séquence cellulaire de rat-région répétitive de Rml"". Nous avons utilisé une séquence unique flanquant cette jonction pour cloner le site original dans lequel s'était intégré Rml. Nous avons séquencé les régions appropriées de ces divers fragments d'ADN. Nos résultats montrent que la molécule Rml s'était intégrée par recombinaison illégitime en dépit de la présence de séquences homologues à proximité du site d'intégration. Nous concluons qu'il n'est pas possible, dans les cellules animales, de faire de l'intégration dirigée en absence de sélection