Contribution à l'étude topographique du site d'attachement des glucides chez la phytohemagglutinine de Phaseolus vulgaris

La Phytohémagglutinine (PHA) est la lectine isolée des fèves de Phaseolus vulgaris (haricots rouges). Cette protéine, en plus d'être un mitogène pour les lymphocytes en culture, possède des propriétés leucoagglutinante et hémagglutinante. Ces trois activités biologiques résultent d'une interaction entre la lectine et les cellules cibles, La nature du récepteur membranaire de la PHA chez le lymphocyte est en voie d'élucidation, mais la nature des acides aminés localisés au site de fixation des sucres chez la PHA reste toujours inconnu. La réponse à cette dernière question nécessite l'utilisation de plusieurs méthodes expérimentales. La méthode que nous avons retenue pour procéder à la cartographie du site d'attachement des glucides chez la PHA est une technique de marquage par affinité. En un premier temps, nous avons procédé à des études d'inhibition d'agglutination dans le but de déterminer la spécificité de la PHA. Nous avons évalué les effets que provoquent des changements de groupements fonctionnels du D-galactose sur l'agglutination d'érythrocytes humains induite par la PHA. Une anomérisation ne produit aucun effet sur l'agglutination. Un changement de groupement fonctionnel en position 2 pour un groupement portant une charge positive résulte en une perte du pouvoir inhibiteur d'agglutination. La position 4 ne peut subir une épimérisation ou changement de groupement fonctionnel sans perte du pouvoir inhibiteur. Des substitutions à la position 1 résulte en une diminution du pouvoir hapténique. Comme le D-galactose semble être le saccharide occupant le premier locus du site d'attachement de la PHA, la mise en place d'une chaîne latérale ne peut se faire qu'en position C-1 chez ce monosaccharide. En une deuxième étape, nous avons synthétisé une série de dérivés du D-galactose portant en position C-1 des chaînes latérales de 4 et 6 atomes de carbone. À l'extrémité de ces chaines se retrouve un groupement carboxylique. Ce dernier a servi de précurseur aux espèces réactives diazo, azido et bromométhylcétone. Les cinétiques d'activation des espèces diazo et azido ont été mesurées. Parallèlement, nous avons synthétisé une série de dipeptides de formule générale Ac-Gly-X-OH où X représente différents acides aminés. La réactivité et le degré de spécificité des dérivés photosensibles du D-galactose envers certains de ces dipeptides ont été évalués