Quelques aspects de la régulation de la pyruvate kinase de type L de foie de rat

La pyruvate kinase de type L est un enzyme allostérique qui devient inactif lorsqu'il est phosphorylé par une protéine kinase cAMP-dépendante. Un extrait de foie de rat a été phosphorylé à l'aide d'ATP- mp32 et fractionné par différents systèmes électrophorétiques sur gels de polyacrylamide soit en milieu non dénaturant à pH 7.0, en milieu basique ou en milieu dénaturant en présence de SDS. La présence de PK peut être révélée in situ sur le gel non dénaturant ou encore localisée par son poids moléculaire sur gel SDS. Le taux de phosphorylation par incorporation de phosphate marqué a été mesuré soit par autoradiographie ou par comptage de la radioactivité à l'aide d'un spectromètre à scintillation.La PK-L de foie de rat a également été purifiée. Pour ce faire un extrait de foie a été chromatographié sur DEAE-Sephacel, précipité avec 60% de sulfate d'ammonium, filtré sur Séphadex G-25 et soumis à une chromatographie d'affinité sur Bleu Sépharose avec élution sélective avec le FDP. Cette purification donne un rendement global de 14.5% et un gain de purification de 72. Enfin l'effet de l'inosine sur la PK-L a été étudié. L'inosine n'affecte pas l'activité de la pyruvate kinase dans les extraits de foie de rats nourris avec une diète riche en fructose (PK-fructose), mais l'augmente lorsque les rats sont traités avec du glucagon (PK-glucagon). L'inosine affecte le K0.5 et le Vmax de la PK-glucagon de la même façon que le FDP, mais possède un comportement différent de celui du FDP en fonction du pH de telle sorte que l'inosine apparaît comme un nouveau type d'activateur de la PK-L