Mecanismo de ação não-genômico dos hormônios tireoidianos em testículos de ratos imaturos: efeitos eletrofisiológicos e captação de 45Ca2+

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia.Os hormônios tireoidianos (HT) regulam a esteroidogênese e a espermatogênese. O mecanismo clássico de ação dos HT ocorre através da ligação com receptores nucleares específicos. Todavia, as iodotironinas podem atuar por vias não-genômicas ou extranucleares, caracterizadas pela rapidez da resposta (de segundos a minutos), e desta forma sinalizam distintas vias de regulação celular. O objetivo do presente estudo foi estudar o envolvimento dos canais de cloreto no efeito hiperpolarizante do T4 em células de Sertoli de túbulos seminíferos de ratos imaturos, e investigar a ação dos HT na captação de cálcio em testículos de ratos imaturos, assim como a caracterização das vias de entrada deste íon estimuladas por iodotironinas. Para isto foram utilizadas as técnicas eletrofisiológica e de captação de 45Ca2+. Nos estudos eletrofisiológicos, os túbulos seminíferos foram mantidos em uma câmara de perfusão com KRb a 32 ºC, pH 7,4 em atmosfera carbogênica (O2:CO2; 95:5 v/v). Quando usado o ácido carboxílico 9-antraceno (9-AC), este era adicionado e após 30 segundos o T4, e o potencial transmembrana monitorado. Para a captação de 45Ca2+, os testículos foram pré-incubados e incubados em KRb na presença de 0,2 µCi 45Ca2+ a 32 ºC, pH 7,4; mantidos em atmosfera carbogênica (O2:CO2, 95:5 v/v). O T3 ou T4 foram adicionados no meio de incubação. Quando usados inibidores, estes eram adicionados 15 minutos antes do hormônio. O efeito hiperpolarizante do T4 foi bloqueado totalmente na presença de 9-AC, indicando o envolvimento de canais de cloreto nesta ação do T4. Este hormônio também estimulou a captação de 45Ca2+, efeito não evidenciado para o T3 nos tempos e doses estudados. O uso de nifedipina e flunarizina, bloqueadores dos canais de Ca2+ dependentes de tensão (CCDT) tipo L e T, respectivamente, bloquearam a ação estimulatória do T4. Este estímulo também foi bloqueado pelo antagonista de canal de K+ dependente de Ca2+, apamina, e pelo 9-AC, antagonista de canal de Cl-, sugerindo um mecanismo de retroalimentação entre o Ca2+ e Cl- e/ou Ca2+ e K+. O inibidor de proteína cinase A (PKA), KT 5720, inibiu completamente o efeito do T4, indicando a ativação desta via no mecanismo de entrada do Ca2+ estimulada por T4. No entanto, este efeito não foi alterado pelo uso de cloreto de estearoilcarnitina, inibidor de proteína cinase C, sendo que este inibidor demonstrou um efeito per se estimulando a captação de 45Ca2+. Destes resultados pode-se concluir que os canais de Cl- são importantes mediadores da ação hiperpolarizante do hormônio T4 em células de Sertoli. O influxo de 45Ca2+ modulado por T4 é dirigido por correntes de canais de cálcio dependentes de tensão, Cl- e K+, bem como, pela atividade da PKA, sinalizando uma via imediata de ação do T4 na membrana plasmática