Étude de la protéase adénovirale : clonage, séquençage, expression dans E. coli et propriétés de l'enzyme recombinante

Ces travaux sur la protéase adénovirale ont permis de démontrer que les enzymes de Ad2 et Ad5 sont interchangeables in vivo par analyse de recombinants intersérotypiques. Des tests de clivage in vitro sur les précurseurs de H2tsl par des membres du sous-groupe C (Ad1, 2, 5 et 6), du sous-groupe B (Ad3 et 7), du sous-groupe E (Ad4) et du sous-groupe D (Ad9) ont confirmé la présence de cette enzyme chez 3 nouveaux sous-groupes et ont montré que tous ces sérotypes peuvent cliver préVII aussi efficacement que leur niveau d'infection le permet. Des expériences de séquençage de Ad3 (sous-groupe B) et de Ad12 (sous-groupe A) ont permis de comparer la séquence de la protéine avec celles de Ad2 et Ad5 (sous- groupe C), de Ad4 (sous-groupe E), de Ad40 (sous-groupe F) et de Ad41 (sous-groupe G) afin de toucher à tous les adénovirus humains. Ces protéines montrent une homologie brute de 58,8% qui atteint 72,0% en tenant compte des changements semi-conservatifs. L'analyse de séquences réglant la traduction de la protéase chez ces sérotypes semble établir une corrélation directe avec l'efficacité de production de particules infectieuses. Tous ces résultats suggèrent que la protéase adénovirale représente une cible de choix pour une chimiothérapie contre tous les adénovirus par l'utilisation d'une seule drogue spécifique. Cette protéase peut être produite par E coli mais s'avère toxique lorsqu'exprimée d'un vecteur faiblement contrôlé. L'enzyme mature par une autocatalyse en trans et maintient sa spécificité de clivage pour ses substrats naturels. Ainsi, la présence de protéines virales, de protéines cellulaires ou encore de modifications post-traductionnelles spécifiques aux cellules d'eucaryotes ou même une phosphorylation ne sont pas absolument essentielles. Des protéines autres que les substrats naturels peuvent aussi être hydrolysées spécifiquement. Un système d'expression, d'enrichissement de l'enzyme et de criblage par anticorps a été mis au point et permet d'envisager la purification à grande échelle afin de poursuivre l'étude de cette protéine. Le site actif usuel des sérine-protéases GDSGG est absent et la protéine n'a présentement aucun homologue par hybridation d'ADN ou par analyse de banques de séquences et pourrait ainsi représenter une nouvelle classe d'enzyme. Son profil d'inhibition non-classique l'associe aux cystéine-protéases de type chymotrypsine qui représentent un intermédiaire évolutif et structural entre les cystéine-protéases et les sérine-protéases