Études sur le développement des cryptes intestinales chez la souris

Le rôle des cryptes dans la prolifération et le renouvellement cellulaire de l'épithélium intestinal a été largement étudié. Cependant nos connaissances sur leur développement et sur les mécanismes impliqués dans le contrôle de leur morphogénèse sont encore très limitées. Suite aux travaux publiés par Calvert et al., (1983) qui ont démontré qu'un extrait organique de liquide amniotique de rat (EOLAR) était capable d'induire la formation des cryptes in vitro, nous avons voulu étudier l'effet de ce même EOLAR sur le développement de la muqueuse intestinale et la formation des cryptes intestinales in vivo. L'approche expérimentale était d'administrer de l'EOLAR à des souris gestantes et d'évaluer ensuite la différenciation fonctionnelle et morphologique de la muqueuse intestinale chez les fœtus. Nous avons démontré que l'EOLAR n'affecte pas la différenciation fonctionnelle de l'entérocyte. Cependant il entraîne un confinement de la zone de prolifération aux espaces intervilleux et une réorganisation morphologique de ces derniers. L'utilisation d'autres paramètres a été nécessaire pour analyser davantage l'effet de l'EOLAR sur la formation des cryptes. Ainsi 2 anticorps monoclonaux soit le MIM-1/130 qui marque le feuillet péricryptal et le MIM-1/39 exprimé par les cellules indifférenciées de la crypte, ont été produits et utilisés comme marqueurs de la différenciation cryptale in vitro et in vivo. La mise en évidence de la courbe de développement de l'expression des deux antigènes en fonction du développement intestinal a révélé qu'ils sont liés à la formation des cryptes et que le processus de formation de ces dernières commence 3 à 4 jours avant la naissance. A 17 jours de gestation, le duodénum des souris traitées à l'EOLAR présente des patrons d'expression (des 2 antigènes) typiques de ceux observés normalement chez des souris âgées de 4 à 5 jours après la naissance. En effet l'EOLAR entraîne une réorganisation rapide des patrons d'expression des 2 antigènes et une accélération de la formation des cryptes in vivo, alors qu'in vitro, il induit l'expression des 2 antigènes après 24 heures de culture et la formation des cryptes 24 heures plus tard. La caractérisation des deux antigènes montre que le MIM-1/130 est un nouveau constituant de la matrice extracellulaire associée aux fibres de collagène du feuillet fibroblastique sous-jacent à l'épithélium de la crypte, de la glande gastrique et de la vésicule biliaire, et que l'antigène MIM-1/39 est une nouvelle glycoprotéine de haut poids moléculaire, localisée dans les grains de sécrétion des cellules indifférenciées de la crypte, des cellules principales des glandes gastriques et des cellules épithéliales de la vésicule biliaire, du pancréas, des glandes salivaires, linguales et lacrymales. En se basant sur l'ensemble de nos observations et celles de la littérature, nous avons élaboré une hypothèse sur le mécanisme de formation des cryptes qui résulteraient d'une réorganisation des espaces intervilleux. Finalement en utilisant ce nouveau marqueur (MIM-1/39) des cellules indifférenciées de la crypte, nous avons démontré que la céruléine stimule leur sécrétion, ce qui ouvre la voie à des études sur l'activité sécrétoire de ces cellules