Détermination de la séquence et études des révertants du gène de la protéase adénovirale

Afin de mieux comprendre le fonctionnement de la protéase adénovirale, nous avons isolé et analysé des révertants du mutant H2ts1. Nous avons aussi séquencé le gène correspondant pour Ad4 par la méthode de Sanger M13/didéoxy et comparé la séquence d'acide aminé déduite avec celles déjà publiées de Ad2, Ad5 et H2ts1. L'étude des révertants a démontré que la mutation ts1 était la seule cause du phénotype observé et qu'elle affectait un domaine critique de l'enzyme. Les expériences de séquençage nous ont permis de suggérer un modèle pour l'enzyme. Elle serait possiblement constituée de 2 domaines distincts. Le domaine N-terminal serait impliqué dans la fixation de l'enzyme sur la chromatine virale et dans l'approche du substrat vers le site actif alors que le domaine C-terminal serait directement responsable de l'activité enzymatique. Le site actif serait situé entre les résidus 150 et 164