Le problème du comportement in vitro des grains de zymogènes du pancréas de rat

Dans un article récent, De Lisle et coll. [Am. J. Physiol. 246, G489-G496, 1986] rapportent une méthode de purification des grains de zymogènes du pancréas de rat par une technique de centrifugation isopycnique en gradient de Percoll. Ils attribuent l'intégrité des granules (jugée par leur stabilité à pH 7) ainsi obtenus à l'utilisation du Percoll: une méthode de purification "douce" par rapport aux simples centrifugations différentielles classiques. Selon ces auteurs, l’instabilité des granules à pH 7, telle qu'observée par tous leurs prédécesseurs, est due à un endommagement mécanique de leur membrane [De Lisle et coll., Am. J. Physiol., 246, G411-G418, 1984]. Après avoir reproduit les principales observations de De Lisle et coll., nous sommes arrivés à démontrer que la stabilité observée n'est pas reliée au Percoll, mais à l'utilisation d'EGTA, de Mg++, et de PMSF dans les milieux proposés par ce groupe pour purifier les G.Z.. A notre avis l'altération de la membrane est enzymatique: les grains purifiés par la méthode classique (sans Percoll), mais en présence des effecteurs appropriés (EGTA, Mg++ et PMSF) sont stables. Le pH conserve cependant une profonde influence sur la stabilité des G.Z. purifiés selon De Lisle et coll.; cela peut refléter une inhibition partielle de l’enzyme qui abime la membrane, lequel enzyme conserve une excellente activité à son pH optimum. Nous avons développé un modèle selon lequel la lipase pancréatique, qui possède une importante activité phospholipasique A1, est fortement impliquée dans cet affaiblissement de la membrane. Ce modèle explique plusieurs des propriétés des G.Z. observées jusqu'à maintenant, dont l'effet des effecteurs de De Lisle et coll. et l’instabilité des granules aux pH avoisinant 7. Des essais impliquant l'acridine orange comme sonde fluorescente n'ont pas permis de mettre en évidence un système de transport actif des protons dans la membrane des grains purifiés, ce qui confirme les résultats obtenus par d'autres groupes de chercheurs