Mécanismes de régulation du récepteur à l'inositol 1,4,5- trisphosphate et son implication dans l'activité transcriptionnelle

Les variations de la concentration cytosolique de Ca[indice supérieur 2+] contrôlent divers processus biologiques tel la contraction, la division cellulaire et la transactivation de gènes. Chez les cellules non excitables, la stimulation de certains GPCRs (G protein coupled receptor) ou récepteurs tyrosine kinase mène à l'activation d'une phospholipase C qui produit de l'inositol 1,4,5-trisphosphate (IP[indice inférieur 3]). L'IP[indice inférieur 3] active un récepteur-canal au niveau du réticulum endoplasmique (RE) et permet une relâche de Ca[indice supérieur 2+] du RE. Il existe trois isoformes distinctes d'IP[indice inférieur 3]R (IP[indice inférieur 3]R-1 à -3) différemment exprimées dans les tissus. Dans ces travaux, nous avons étudié un mode de régulation de l'IP[indice inférieur 3]R-2 par la PKC, une kinase elle-même activée lors de la réponse calcique. Nous avons aussi vérifié l'implication de chaque isoforme d'IP[indice inférieur 3]R dans l'activité transcriptionnelle des facteurs de transcription sensibles au Ca[indice supérieur 2+] NFAT et CREB.Les cellules AR4-2J expriment principalement l'IP[indice inférieur 3]R-2 (86%), ce qui en fait un bon modèle d'étude pour les mécanismes de régulation de l'IP[indice inférieur 3]R-2. Dans la première étude, nous avons vérifié si la PKC influençait l'activité calcique de l'IP[indice inférieur 3]R-2. D'abord, nous avons montré que l'IP[indice inférieur 3]R-2 est majoritairement exprimé dans les cellules AR4-2J. Nous avons montré par phosphorylation in vitro et in cellulo que l'IP[indice inférieur 3]R-2 est phosphorylé par la PKC. Nous avons montré que le traitement par la PKC réduit la réponse calcique induite par l'IP[indice inférieur 3] sur des cellules perméabilisées. Finalement, nous avons démontré que la réponse calcique induite par le CCh ou l'EGF sur des cellules entières était réduite avec l'activation de la PKC. Ces résultats indiquent que l'IP[indice inférieur 3]R-2 est une autre cible de la PKC permettant de contrôler l'intensité de la réponse calcique. Dans la deuxième étude l'objectif était de déterminer l'implication des isoformes d'IP[indice inférieur 3]R sur l'activité des facteurs de transcription sensibles au Ca[indice supérieur 2+] NFAT et CREB. Par l'approche des gènes rapporteurs de l'activité de NFAT ou CREB, nous avons montré que NFAT était activé par la voie de la calcineurine et que CREB par les voies de CamKII et de la calcineurine dans les cellules HEK 293A. Nous avons démontré que l'invalidation de l'IP[indice inférieur 3]R-2 diminuait la réponse calcique induite par le CCh et que la costimulation avec le VIP pouvait la restaurer. Nous avons montré que l'activité transcriptionnelle de NFAT était affectée, contrairement à celle de CREB, par l'invalidation de l'IP[indice inférieur 3]R-2. Finalement, nous avons montré que l'IP[indice inférieur 3]R-2, et aussi l'IP[indice inférieur 3]R-1, semblent jouer un rôle secondaire, différent de celui de transporteur de Ca[indice supérieur 2+], dans le mécanisme d'activation de NFAT. Ces résultats laissent envisager que l'IP[indice inférieur 3]R serait impliqué dans la formation d'un complexe protéique facilitant l'activation de NFAT