Association entre le génotype et l'excrétion du globotriaosylcéramide chez les patients atteints de la maladie de Fabry et la gestion de biobanques dans la recherche en génétique humaine

La maladie de Fabry est une maladie métabolique héréditaire liée au chromosome X et est causée par un déficit de l'enzyme l'[alpha]-galactosidase A. Plus de 350 mutations ont été répertoriées chez les patients atteints. L'incidence de la maladie de Fabry est variable à travers le monde: entre 1:3 100 en Italie à 1:833 000 au Portugal, avec une moyenne évaluée à 1:40 000. Les hommes hémizygotes présentent une expression clinique très variable et sont souvent atteints plus sévèrement que les femmes hétérozygotes, qui peuvent aussi manifester des symptômes. Un biomarqueur est excrété de façon prédominante dans l'urine de ces patients, le globotriaosylcéramide (Gb[indice inférieur 3]), un glycosphingolipide qui provient des cellules épithéliales rénales. Nous avons entrepris l'élaboration d'une méthode d'analyse du biomarqueur Gb[indice inférieur 3] dans l'urine déposée sur papier filtre de patients hémizygotes et hétérozygotes atteints de la maladie de Fabry, en utilisant la spectrométrie de masse en tandem couplée à la chromatographie en phase liquide. Suite au développement et à la validation de cette méthodologie, nous l'avons raffinée et améliorée de façon à pouvoir analyser simultanément le Gb[indice inférieur 3] et la créatinine (multiplex) à l'intérieur d'un temps plus court, soit en 2.6 minutes. Le dosage de la créatinine permet de normaliser les valeurs obtenues du Gb[indice inférieur 3]. Cette méthodologie répond à plusieurs impératifs cliniques: permettre un dépistage à haut risque de la maladie de Fabry et assurer le suivi et le monitoring des patients atteints qui sont sous thérapie enzymatique de remplacement. Nous répondons aussi à la question concernant l'étude de faisabilité d'analyse du Gb[indice inférieur 3] sur l'ensemble d'une population donnée. Aussi, l'établissement d'un diagnostic précoce avant l'apparition de troubles cliniques irréversibles est potentiellement important pour le patient et permet d'offrir un conseil génétique. Des corrélations phénotype-génotype hautement significatives ont pu être établies avec les taux d'excrétion du Gb[indice inférieur 3], à savoir que l'excrétion du Gb[indice inférieur 3] urinaire est en corrélation directe avec les types de mutations à l'étude, le sexe du patient et le traitement. Par contre, il n'y a pas de corrélation significative entre l'âge du patient et l'excrétion du Gb[indice inférieur 3]. Nous avons pu constater que certaines mutations non-sens provoquent une excrétion plus forte du Gb[indice inférieur 3] urinaire que d'autres types de mutations. Aussi, par les différences des moyennes des moindres carrés, nous avons trouvé une corrélation significative au niveau de l'excrétion urinaire du Gb[indice inférieur 3] et des mutations faux-sens et non-sens, de même qu'au niveau des mutations non-sens et des mutations de jonctions d'épissage. Aucune différence significative n'a été relevée entre deux groupes de patients avec la même mutation faux-sens, l'un provenant d'une région de la Nouvelle-Écosse où il subsiste un effet fondateur et l'autre issu de plusieurs régions à travers le monde. En réponse aux interrogations d'ordre éthique, nous avons élaboré un modèle de gestion des biobanques dans la recherche institutionnelle qui répond à toutes les questions soulevées précédemment et assure donc la protection du sujet participant et la confidentialité des informations génétiques correspondantes. Compte tenu de la complexité et des conséquences de tout projet de recherche impliquant des biobanques, nous avons élaboré un processus de formation continue sur le thème des bonnes pratiques éthiques applicables aux biobanques. Ce processus implique l'investigateur principal, le personnel de recherche, le comité d'éthique et l'institution qui travaillent en synergie en vue d'assurer une participation informée du sujet