Élucidation du rôle et de la spécificité de la n-glycosylation du récepteur AT[indice inférieur 1] de l'angiotensine II

Le récepteur AT[indice inférieur 1] est une glycoprotéine de la famille des récepteurs couplés aux protéines G (GPCR) qui répond à l'angiotensine II et joue un rôle important dans la régulation du système cardiovasculaire. Nous avons évalué l'importance de la N-glycosylation sur les propriétés pharmacologiques du récepteur AT[indice inférieur 1] . Nous avons montré que les trois sites endogènes aux positions 4, 176 et 188 sont décorés d'oligosaccharides et que la mutation du site consensus en position 176 cause une diminution d'expression membranaire due à une accumulation dans le réticulum endoplasmique (RE). Afin d'élucider les mécanismes responsables, nous avons vérifié l'interaction entre l'oligosaccharide 176 et calnexine, une chaperonne/lectine impliquée dans le contrôle de qualité des glycoprotéines. Nous avons démontré que le récepteur AT[indice inférieur 1] interagit spécifiquement et fortement avec la calnexine. Toutefois, à notre grande surprise, le récepteur AT[indice inférieur 1] non-glycosylé interagit aussi avec calnexine, suggérant une interaction directe (protéine-protéine) entre ces partenaires. Nous avons également exploré l'importance de l'émondage des oligosaccharides et montré que la ER mannosidase I participe étroitement à l'expression membranaire du récepteur AT[indice inférieur 1] en clivant un résidu mannose de l'oligosaccharide dans le RE. Ces résultats suggèrent l'importance de l'émondage pour la progression du récepteur AT[indice inférieur 1] vers la membrane plasmique. Finalement, nous avons répertorié tous les GPCRs non-orphelins et cette analyse permis [i.e. permit] de noter une spécificité dans la localisation des sites de N-glycosylation d'un GPCR. Nous avons donc créé des sites de glycosylation non-naturels dans les trois boucles extracellulaires du récepteur AT[indice inférieur 1] . Ces études ont révélé qu'un oligosaccharide dans la première ou troisième boucle extracellulaire (ECL 1 ou ECL3) cause une diminution importante d'expression membranaire due à une dégradation protéasomale. Nous avons montré qu'un récepteur glycosylé en position 174 (ECL2) au lieu de 176 est mal replié. En effet, celui-ci interagit plus que le récepteur de type sauvage avec Hsp70, une protéine cytoplasmique impliquée dans le repliement des protéines cytosoliques et le contrôle de qualité. Ainsi, malgré un défaut de repliement, le mutant AT[indice inférieur 1]-174 a échappé au système de contrôle de qualité lui permettant de trafiquer vers [à] la membrane plasmique. Ensemble, ces résultats suggèrent, d'une part, le rôle important des lectines pour le ciblage d'une glycoprotéine vers la membrane plasmique et d'autre part, une grande spécificité dans la localisation des sites de N-glycosylation du récepteur AT[indice inférieur 1]