Diagnóstico molecular da tuberculose bovina

Dissertação apresentada para a obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e Biomedicina, pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Ciências e TecnologiaA tuberculose bovina é uma importante doença animal com elevado impacto económico. O agente etiológico desta doença é a bactéria Mycobacterium bovis que, para além de afectar bovinos, causa também tuberculose noutras espécies de mamíferos, incluindo o Homem. Esta micobactéria pertence ao complexo Mycobacterium tuberculosis (MTC) que inclui espécies filogeneticamente muito próximas, nomeadamente M. tuberculosis - principal agente da tuberculose humana, e M. caprae - associado a tuberculose em caprinos. Os métodos de diagnóstico convencional da tuberculose não diferenciam entre as várias espécies do MTC, cuja discriminação é normalmente apenas possível com recurso ao diagnóstico molecular, nomeadamente à análise de polimorfismos do gene gyrB. Recentemente, têm sido descritas várias Regiões de Diferença (RDs) no genoma destas espécies cuja análise se apresenta como alternativa fiável para a sua identificação. Realizou-se neste trabalho um estudo comparativo in silico que permitiu desenhar conjuntos de primers para analisar a presença ou ausência de determinadas RDs nas espécies do MTC. Esta abordagem possibilitou uma fácil e rápida discriminação entre estas espécies. Paralelamente, recorreu-se a nanossondas de ouro coloidal para identificar os principais membros do MTC tendo como alvo o gene gyrB. Foram desenhadas três nanossondas - uma para identificação do complexo, uma específica para M. bovis e outra para M. tuberculosis. Os resultados obtidos sugerem a possibilidade de utilização desta abordagem na identificação específica de membros do MTC