Comparação dos métodos parasitológico, imunológico e molecular na detecção de Leishmaniose Tegumentar Americana no estado de Santa Catarina

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia.O presente estudo teve como objetivo verificar a eficácia da PCR no diagnóstico da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) em pacientes do Estado de Santa Catarina comparando com a microscopia e intradermorreação. Duas formas de preservação das amostras e de extração de DNA foram testadas: imprinted em papel de nitrocelulose (NP) e imersão em etanol 70% (EB). A extração do imprinted em papel de nitrocelulose (NP) foi realizada por eluição e a imersão em etanol 70% (EB) pelo método do fenol-clorofórmio. As amostras foram analisadas por PCR, utilizando oligonucleotídeos direcionados a região conservada do minicírculo do DNA cinetoplástico (kDNA). A microscopia detectou a presença de Leishmania sp. 80% das 55 amostras analisadas enquanto a PCR detectou a presença de Leishmania sp. em 74,5% das 55 amostras e em 75,5% de 45 amostras de pacientes submetidos ao Teste de Montenegro. A extração de DNA pelo fenol-clorofórmio das amostras EB mostrou-se mais eficiente quando comparada com a extração por eluição das amostras NP. Além disso, a PCR-RFLP foi empregada para a identificação das espécies de Leishmania das amostras de pacientes. A maioria das amostras foi identificada como L. (Viannia) braziliensis. Este trabalho sugere o uso da PCR para a confirmação dos casos de ACL onde a microscopia ou intradermorreação sejam negativas e mostra a predominância de L. (V.) braziliensis como espécie causadora da LTA em SC