Extração e caracterização de uma substância antimicrobiana produzida por bacillus amyloliquefaciens

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias.Extraiu-se uma substância antimicrobiana de uma cultura 18-24 h de Bacillus amyloliquefaciens em Caldo Triptona de Soja suplementado com Extrato de Levedura a 0,6% (TSB-YE - OXOID) por precipitação com 20% de saturação de sulfato de amônio, ressuspensão em tampão fosfato pH 7,2, diálise em membrana 3,5kD (Spectra/Por) e esterilização por filtração (membrana 0,22mm - Millipore). Esta substância foi caracterizada segundo sua sensibilidade a temperatura (50, 75 e 100°C) e pH (2,0 a 9,0). Para determinação de sua natureza química empregaram-se as enzimas (Sigma) protease de S. griseus (P6911), protease de A. saitoi (P2143), a-quimotripsina (C4129) e pepsina (P6887) a 50mg/mL e a a-amilase Termamyl 120 L (Novo Nordisk) a 1% v/v. Para verificação da manutenção da atividade após tais ensaios, o extrato foi aplicado em poços preparados em placas de Ágar Triptona de Soja suplementado com Extrato de Levedura a 0,6% (TSA-YE - OXOID) pré-semeadas com 0,1 mL de uma cultura 105 UFC/mL de Listeria monocytogenes. Determinou-se sua concentração mínima inibitória (CMI) sobre uma cultura 104 UFC/mL de L. monocytogenes e seu peso molecular por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Como resultado dos testes de caracterização, a substância apresentou-se estável a 50°C, perdendo sua atividade gradualmente a 75°C e rapidamente a 100°C. Também foi estável em valores de pH de 2,0 a 9,0. Perdeu parcialmente sua atividade quando tratada com as enzimas protease de S.griseus, protease de A. saitoi e a-amilase, indicando uma estrutura glicoproteica. A CMI foi 25% v/v e a substância agiu de forma bacteriostática. A eletroforese indicou um peso molecular inferior a 6.500 Daltons