Enzootic bovine leukosis: evaluation of diagnostic techniques (AGID, I-ELISA, WB and PCR) in experimentally inoculated bovines

Se diseñaron dos experiencias utilizando un total de 12 bovinos (8 inoculados y 4 controles) de 2 años de edad. La transmisión de la infección con virus de la Leucosis Bovina (VLB) se llevó a cabo a partir de 5, 10 o 50 µl de sangre total periférica de bovinos seropositivos asintomáticos, utilizando distintas vías: intradérmica, subcutánea, intramuscular o endovenosa. Se realizó el seguimiento semanal en ambas experiencias, durante 4 meses cada una, obteniendo los siguientes resultados. ELISA indirecto (ELISA-I): la detección de anticuerpos se comprobó en todos los animales entre la 3º y 6º semana posinfección (PI). Inmunodifusión en agar (ID): todos los animales inoculados dieron positivos entre la 4º y 6º semana, manteniéndose débiles positivos el 40% de los animales hasta la 6º semana PI. Western Blot (WB): los sueros positivos mostraron reactividad para la gp51 y la p24. Otras proteínas (gp30, p15, p12 y p10) no fueron detectadas en ningún caso. En el 90% de los bovinos inoculados, los anticuerpos contra la p24 se detectaron antes (2º-4º semana PI) que los anticuerpos contra la gp51. PCR: Una nested PCR fue desarrollada con primers para un segmento conservado del gen env. El 75% de los bovinos fueron positivos a la 2º semana PI. Conclusión: 1) Todos los animales inoculados, aún con mínimo volumen de sangre (5 µl) y por cualquiera de las vías, dieron positivo a las técnicas aplicadas. 2) Las pruebas ID y ELISA-I son de especial utilidad en estudios poblacionales, con mayor sensibilidad esta última. 3) Las técnicas de WB y PCR se consideran alternativas para los casos en que se requiera confirmación.Two experiments were designed using a total of twelve two years old bovines (8 inoculated and 4 controls). The transmission of infection with Bovine Leucosis Virus (BLV) was made with blood of seropositive, asymptomatic bovines (5, 10 and 50 µl) using different ways (ID, SC, IM and EV). All animals were weekly monitored during four month and analyzed comparatively applying the diagnostic methods developed in our laboratory. Indirect ELISA (I-ELISA) : Antibodies at levels higher than cut off point was found between the 3rd and 6th postinoculation (PI) week. Immunodiffusion in agar (ID): All inoculated animals resulted positive between the 4th and 6th PI week. 40% of the animals kept weak positives until the 6th week. Western Blot (WB): The positive serums showed reactivity against the gp51 and the p24. No other proteins (gp30, p15, p12 and p10) were detected in any case. In 90% of inoculated bovines, the antibodies against the p24 were detected before (2nd- 4th PI week) than the antibodies against the gp51. PCR: a Nested-PCR was developed with primers for a stored segment of the env gen. In 75% of bovines provirus were detected 2 weeks PI. From the results of our study we can conclude that: 1) All inoculated animals (through any of the considered ways) made it positive in response to our techniques even those with the minimum blood volume (5 µl). 2) ID and I-ELISA tests are very useful in population studies, being the latter more sensitive. 3) The WB and PCR techniques are alternatives tests for cases requiring confirmation.Facultad de Ciencias Veterinaria