Identifizierung funktioneller Domänen im C-Terminus von pUL48 für dessen nukleären Export und die Virusmorphogenese des Humanen Zytomegalievirus

Die Morphogenese von infektiösen Viruspartikeln des humanen Zytomegalievirus (HCMV) findet in zwei unterschiedlichen Zellkompartimenten statt, dem Zellkern und dem Zytoplasma. Die Tegumentierung ist essentieller Bestandteil bei der Morphogenese, bei welcher zahlreiche virale Proteine in das sich bildende Virion eingebaut werden und die Verbindung zwischen dem Kapsid und der Hüllmembran herstellen. Die Initiierung der Tegumentierung, die daran beteiligten Proteine und deren intrazelluläre Lokalisation sind allerdings noch weitgehend unklar. Das Tegumentprotein pUL48 ist eines der größten viralen Proteine, welches innerhalb der Herpesviren hochkonserviert ist und bei der Tegumentierung eine entscheidende Rolle spielt. Dabei scheint es so zu sein, dass der C-Terminus dieses Proteins für dessen Funktion im viralen Replikationszyklus essentiell ist. In dieser Arbeit konnten die Bedeutung des C-Terminus von pUL48 bestätigt und darüber hinaus zwei funktionelle Domänen identifizieren werden. Zum einen ist im C-Terminus eine nukleäre Exportfunktion determiniert und zum anderen befinden sich dort auch wichtige Bereiche für die Assoziation von pUL48 mit dem Kapsid. Für diese Untersuchungen wurden vier Viren mit verschiedenen Mutationen des pUL48-C-Terminus charakterisiert. Durch Wachstumskinetiken und den Fokus-Expansion-Assay konnten gezeigt werden, dass der C-Terminus des pUL48 für die Virusausbreitung und Morphogenese infektiöser Partikel essentiell ist. Mit Hilfe der indirekten Immunfluoreszenz und der Elektronenmikroskopie konnte für Mutationen im C-Terminus von pUL48 eine beeinträchtigte Interaktion zwischen pUL48 und dem Kapsid festgestellt werden, was vermutlich zu einer Akkumulation von nur teilweise tegumentierten Kapsiden in der Zellperipherie führt. Lokalisationsstudien mit pUL48 konnten außerdem eine verstärkte nukleäre Akkumulation des Proteins, bei Deletion der C-terminalen 80 und 28 Aminosäuren, feststellen. Allerdings konnte eine zu diesen Beobachtungen passende nukleäre Exportsequenz in pUL48, welche durch Analysetools vorhergesagt war, mittels Immunfluoreszenzmikroskopie nur partiell bestätigt werden. Somit führte diese Arbeit durch die Entdeckung neuer essentieller Domänen nicht nur zu einem Erkenntnisgewinn bezüglich der Tegumentierung und der Bedeutung des Tegumentproteins pUL48 für den viralen Replikationszyklus, sondern identifizierte außerdem eventuelle zukünftige Targets für eine antivirale HCMV-Therapi