Detection of Leifsonia xyli subsp xyli in presprouted seedcane

The first great change in recent years of the Brazilian sugarcane industry occurred when mechanical harvest replaced the manual cuttings of burned canes. The second transformation has started with mechanization of planting materials thanks to new methodologies such as pre-sprouted cane (MPB in Portuguese). To ensure the success of this innovation, however, is paramount the use of clean seed cane, especially against ratoon stunting disease, caused by the fastidious bacterium Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx). This disease is considered the most important and the only means of transmission to new area is the use of contaminated propagative materials. Therefore, the purpose of this work was to develop a routine diagnostic test for early detection of Lxx in MPB seedlings. In the first assay, four previously published pair of primers, Cxx ITSf#5/Cxx ITSr#5, Cxx1/Cxx2, C2F/C2R, LX23SF/LX23SR, was challenged under the conditions described, as well as, our own modifications against adult diseased sugarcane with various concentrations of Lxx. In the second assay, two of the best primers/conditions were tested against MPB seedlings of 45 and 60 days of age derived from Lxx-contaminated materials. Our result showed primers Cxx ITSf#5/Cxx ITSr#5 run under our modifications was the recommended since Lxx was detected in all 52 MPB seedlings of 45 days resulted from propagative materials contaminated with 109 up to 106 UFC/mL.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)A primeira grande mudança nos últimos anos do setor sucroenergético brasileiro ocorreu quando a colheita mecânica substituiu os cortes manuais de canas queimadas. A segunda transformação começou com a mecanização de materiais de plantio e isso está sendo possível pelo uso da nova metodologia: mudas pré-brotada (MPB). Para garantir o sucesso desta inovação é fundamental o uso de MPB sadias, especialmente contra a doença raquitismo-das-soqueiras, causada pela bactéria fastidiosa Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx). Esta doença é considerada a mais importante do setor e os únicos meios de transmissão para novas áreas é pelo uso de materiais propagativos contaminados. Portanto, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um teste de diagnóstico de rotina para a detecção precoce de Lxx em MPB. No primeiro ensaio, quatro pares de primers já publicados, Cxx ITSF # 5/Cxx ITSr # 5, Cxx1/ Cxx2 , C2F/C2R , LX23SF/LX23SR , foram desafiados sob as condições recomendadas pelos autores, bem como, as nossas próprias modificações. Para isso foram utilizadas cana-de-açúcar adulta com Lxx em várias concentrações. No segundo ensaio, dois dos melhores primers/condições foram testadas contra MPB de 45 e 60 dias de idade derivadas de materiais contaminados com Lxx. Nosso resultado mostrou que o par de primers CXX ITSF # 5/Cxx ITSr # 5 sob nossas modificações foi o mais acurado, uma vez Lxx foi detectada em todos os 52 MPB de 45 dias originadas de materiais propagativos contaminados com 109 até 106 UFC / mL de Lxx