Nuevas estrategias antitrombóticas para el tratamiento de la cardiopatía isquémica

A pesar de los beneficios obtenidos con los salicilatos y otros antitrombóticos en la enfermedad isquémica coronaria, estos no erradican los eventos trombóticos. Ello ha derivado en el desarrollo y evaluación de nuevas estrategias antitrombóticas.Esta tesis se centra en el estudio de las propiedades antiplaquetares/antitrombóticas de nuevos fármacos destinados al tratamiento de la enfermedad aterotrombótica, para esclarecer sus beneficios clínicos. Para ello, se realizó el estudio de trombosis ex vivo desencadenada por substratos vasculares lesionados en condiciones de flujo controladas utilizando la cámara Badimon en el modelo experimental porcino después del tratamiento (local, oral o intravenoso) con un inhibidor de la adhesión plaquetar (saratina) o tres donadores de óxido nítrico (NO) (LA419, LA810 y LA816). Tras anestesiar, heparinizar y cateterizar a los animales se estableció un circuito arteriovenoso en el que se interpuso la cámara que contenía el substrato trombogénico. Primero se evaluó el efecto inhibidor de Saratina (tratamiento local, 30 µg/ml) sobre la trombosis desencadenada por pared aterosclerótica humana. Saratina redujo significativamente la deposición plaquetaria a velocidades de cizalladura típicas de vasos ligeramente estenóticos (800/s), siendo más efectiva a mayor lesión. En segundo lugar, se evaluó el efecto de tres donadores de NO administrados de manera crónica (LA419: 0.9-1.8-3.6-5 mg/Kg durante 10 días/p.o.), y aguda (LA810 y LA816: 6.6 nmols/Kg/min, 2 h i.v.) en la trombosis desencadenada por pared porcina ligera y severamente dañada. El tratamiento con LA419 (0.9 mg/kg) redujo la deposición plaquetar desencadenada por ambos tipos de lesión a velocidades de cizalladura típica de vasos con stent mientras que fueron necesarias dosis de 3.6 mg/kg para reducir la formación del trombo a velocidades de cizalladura de vasos moderadamente estenóticos. Ninguna dosis alteró la presión arterial ni los parámetros bioquímicos. En comparación, el IS-5-MN (mononitrato utilizado en la práctica clínica) sólo redujo la formación del trombo a concentraciones asociadas a un aumento en las enzimas hepáticas e hipotensión Las propiedades antiplaquetares tras el tratamiento agudo con LA810 y LA816 se compararon con el GSNO (nitrosotiol standard. Todos ellos redujeron de forma similar la trombosis desencadenada por lesión ligera y severa a bajas y altas velocidades de cizalladura. A diferencia del LA810-LA816, la administración de GSNO iba asociada a efectos hipotensores que limitan su uso terapéutico. Finalmente, se evaluó los posibles efectos sinérgicos tras la administración del LA816 con aspirina y clopidogrel en comparación con la administración individual de cada uno de ellos. Se observó que la administración i.v de LA816 presentaba propiedades antitrombóticas similares a las observadas tras la administración oral durante 3 días de clopidogrel. Es más, la administración conjunta de ambos fármacos redujo significativamente la deposición plaquetar en relación a su administración individual.En primer lugar se puede concluir que la inhibición, local y específica, de la adhesión plaquetar por la saratina reduce la trombosis desencadenada por distintos grados de lesión aterosclerótica humana bajo condiciones hemodinámicas típicas de arterias coronarias moderadamente estenóticas, sin la presencia de efectos sistémicos y que la saratina parece reducir más eficazmente la trombosis desencadenada por superficies altamente trombogénicas que la inducida por superficies denudadas o con presencia de estrías grasas. En segundo lugar el LA419 inhibe la formación de trombo inducida por distintos grados de lesión vascular y condiciones de flujo de manera dosis dependiente sin producir hipotensión o alterar las enzimas hepáticas. En tercer lugar, la administración de LA810 y LA816 reduce la trombosis desencadenada por pared vascular dañada independientemente de la velocidad de cizalladura, y todo ello sin modificar la presión arterial, Finalmente, la administración aguda de LA816 proporciona la misma protección antitrombótica que 3 días de tratamiento con clopidogrel.Despite the benefits obtained with salicilates and other antithrombotics in the ischemic coronary disease, thrombotic events still occur. This has led to the development and evaluation of new antithrombotic strategies.My PhD focuses on the study of the antiplatelet/antithrombotic properties of some new drugs for the treatment of the aterothrombotic disease to clarify their clinical benefits. To this end, we studied ex vivo the thrombosis unleashed by damaged cardiovascular substrates under controlled flow conditions using the Badimon chamber in the experimental swine model after treatment (local, oral, intravenous) with a platelet adhesion inhibitor (saratin) or three nitric oxide (NO) donors (LA419, LA810 and LA816). After having anesthetised, heparinised and catheterised the animals, an arterio-venous shunt with the chamber containing the thrombogenic substrate embedded was established.Firstly, the inhibitory effect of saratin (local treatment, 30 μg/mL) on the thrombosis unleashed by atherosclerotic human wall was evaluated. Saratin significantly reduced platelet deposition at shear rates typical of slightly stenotic vessels, being the more effective the larger the lesion. Secondly, the effect of the three NO-donors administered either chronically (LA419: 0.9-1.8-3.6-5 mg/kg for 10 days/p.o.) or acutely (LA810 and LA816: 6.6 nmol/kg/min, 2 h i.v.) on thrombosis unleashed by slightly and severely damaged porcine wall was evaluated. Treatment with LA419 0.9 mg/kg decreased platelet deposition unleashed by both types of lesion at shear rates typical of stented vessels, whereas the 3.6 mg/kg dosing was needed to decrease the formation of thrombus at shear rates typical of moderately stenotic vessels. No dosing altered the blood pressure or the hematological parameters. In comparison, IS-5-MN (mononitrate used in clinical practice) only decreased thrombus formation at concentrations leading to hypotension and increase in hepatic enzymes. After the acute treatment with LA810 and LA816, their antiplatelet properties were compared to those of GSNO (standard nitrosothiol). All three of them similarly reduced the thrombosis unleashed by light and severe damage at low and high shear rates. In stark contrast with LA810-LA816, the administration of GSNO was associated to a hypotensive effect, limiting its therapeutical use. Finally, the possible synergetic effects of the administration of LA816 together with aspirin and clopidogrel were compared to their administration alone. It was observed that the i.v. administration of LA816 presented antithrombotic properties similar to those observed after 3 days of orally administering clopidogrel. Furthermore, the joint administration of both drugs significantly reduced platelet deposition compared to their administration alone.Firstly, it can be concluded that inhibition, both local and specific, by saratin of platelet adhesion reduces thrombosis unleashed by different degrees of atherosclerotic human lesion under hemodynamical conditions typical of moderately stenotic coronary arteries while not presenting systemic effects, and that saratin seems to reduce more efficaciously thrombosis unleashed by highly thrombogenic surfaces rather than the one induced by mildly damaged or fatty-streaks presenting surfaces. Secondly, LA419 inhibits thrombus formation induced by several shear rates and degrees of vascular damage in a dose-dependent manner, without causing hypotension or altering the hepatic enzymes. In third place, administration of LA810 or LA816 reduces thrombosis unleashed by damaged vessel wall independently of the shear rate, while not modifying the blood pressure. Finally, acute administration of LA816 grants the same antithrombotic protection as 3 days of treatment with clopidogrel