Cuantificación de la expresión del gen proopiomelanocortina (POMC) en linfocitos periféricos de pacientes sometidos a cirugía, bajo anestesia intradural

INTRODUCCIÓNLas variaciones en la expresión genética del sistema opioide endógeno pueden aportarnos nuevos parámetros para valorar la eficacia analgesica por via intratecal de anestésicos locales y opiáceos, su influencia sobre el estrés perioperatorio y la rehabilitación postoperatoria .OBJETIVOS1.- Cuantificar las variaciones de la expresión del gen POMC en linfocitos periféricos y los niveles plasmáticos de ACTH, que ocurren durante el estrés anestésico - quirúrgico, utilizando anestesia loco regional subaracnoidea con bupivacaína más metadona.2.- Estudiar las variaciones de estos parámetros, POMC y ACTH, en diferentes momentos perioperatorios.PACIENTES Y METODOSe estudian 23 pacientes, 13 hombres y 10 mujeres, con media de edad de 66,78 ± 8,74, programados para cirugía de prótesis total de cadera, bajo anestesia subaracnoidea con bupivacaína y metadona, en 4 fases de estudio:1ª FASE: Preoperatoria 2ª FASE:Intraoperatoria después de la anestesia-analgesia subaracnoidea.3ª FASE: En la sala de reanimación posquirúrgica al revertirse el bloqueo sensitivo. 4ª FASE: A las 8h a.m. del 2º DIA de la intervención quirúrgica. La valoración de la expresión genética del gen POMC en células mononucleadas de sangre periférica mediante:- RT-PCR a punto final.- PCR cuantitativa en tiempo real.- Sistema QuantiGene de Panomics.Medición de los niveles plasmáticos de ACTH.El estudio estadístico de los resultados se ha realizado mediante estadística descriptiva para los datos demográficos y estadísticos de contraste para la comparación de las medias, en este estudio longitudinal para datos apareados se utilizó el test de Friedman.RESULTADOS Fase 1: Preoperatorio.EL valor de POMC1 no sigue una distribución normal, mediana 6210 ciclos y amplitud intercuartil 2550 ciclos, rango promedio (RP) 3,20 Los niveles plasmáticos de ACTH1 tienen un valor medio de 5,5 ± 2,7 DE pmol / L. Rango promedio (RP) 3,75 Fase 2: Intraquirurgico.Después de la realización de la anestesia subaracnoidea y sedación, la expresión de RNAm de POMC en linfocitos periféricos descienden en todos los pacientes y los niveles plasmáticos de ACTH también disminuyen en los pacientes donde fue medido.POMC2 valor medio 5637,25 ± 1205,78 DE ciclos, RP 1,90ACTH2 valor medio 2,762 ± 1,5146 DE pmol / L, RP 2,25Ambos valores son estadísticamente significativos.Lo que más llama la atención de nuestros resultados es el descenso acusado en todos los pacientes de la expresión del gen POMC y los niveles plasmáticos de ACTH, en el intervalo de tiempo comprendido entre la punción del catéter intravenoso ( 1ª muestra, fase I) y la punción de la vía venosa central por vena basílica ( 2ª muestra, fase II), en este intervalo ocurre :- Punción intradural con anestésico local mas Metadona- Sedación- Incisión quirúrgica.Este hallazgo contrasta con otros estudios donde, aunque en menor medida en anestesia raquídea versus anestesia general, existe aumento de la respuesta endocrino-metabólica durante el comienzo de la cirugía. Fase 3: Postoperatorio inmediato.En la sala de reanimación posquirúrgica al revertirse el bloqueo sensitivo- motor, los valores de ACTH continúan en descenso, en algunos pacientes son casi indetectables, mientras que la expresión de POMC aumenta hasta valores próximos a los de la Fase 1POMC3 valor medio 6558 ± 1878 ciclos, RP 2,45ACTH3 mediana 1,3, A intercuartil 2,5, RP 1,69Fase 4: Postoperatorio tardío.A las 48h de la intervención quirúrgica, a las 8h am, aumentan los niveles plasmáticos de ACTH, mientras que la expresión de POMC se mantiene en valores similares a la Fase 3. La medición de POMC en la Fase 4, si exceptuamos los valores "outliers", tiende a valores superiores a la Fase 1.POMC 4 mediana de 6215, A intercuartil 2005 ciclos, RP 2,45ACTH 4 valor medio 2,85 ± 1,84 DE pmol / L, RP 2,31.CONCLUSIONES.1) El proceso anestésico quirúrgico conlleva unos niveles de estrés, que pueden observarse midiendo diferentes parámetros como son los niveles plasmáticos de ACTH y la expresión de gen POMC en linfocitos periféricos. 2) En la fase II, intraoperatorio, encontramos una disminución de la expresión en linfocitos periféricos del gen POMC, y también disminuyen los niveles plasmáticos de ACTH, ambos valores son estadísticamente significativos. 3) Durante la recuperación posquirúrgicaposquirúrgicaposquirúrgica inmediata (fase III) los niveles plasmáticos de ACTH son muy bajos (en algunos casos indetectables), mientras que la expresión de POMC aumenta. 4) A las 48h de la intervención quirúrgica (fase IV) los valores de POMC, si prescindimos de los valores extremos "outliers", son superiores a los encontrados preoperatoriamente (fase I), luego la expresión de este gen durante el periodo postoperatorio presenta un aumento progresivo. En esta fase los valores de ACTH también se incrementan.INTRODUCTIONVariations in the genetic expression of the endogenous opioide system may be able to provide new parameters for assessing the analgesic efficacy of intradural local anaesthetics and opioids, their influence of peri-operative stress and post-operative rehabilitation.OBJECTIVES1 Quantify variations in the expression of the gene POMC in peripheral lymphocytes and plasmatic levels of ACTH occurring during surgical - anaesthetic stress using intradural loco regional anaesthesia with bupivacain and methadone.2 Study the variations in these parameters, POMC and ACTH at different peri-operative stages.PATIENTS AND METHOD23 patients were studied, 13 being men and 10 women with an average age of 66, 78 + 8, 74, all programmed for total hip arthroplasty under intradural anaesthesia with bupivacain and methadone, in 4 phases:1st phase: Preoperative2nd phase: Intra-operative after intradural anaesthesia-analgesia.3rd phase: In the post-surgical reanimation area when regaining feeling in the legs.4th phase: At 8 o'clock in the morning of the 2nd day of surgical intervention.The evaluation of the genetic expression of the gene POMC in mononuclear cells of peripheral blood by means of: - RT-PCR at its final point.- PCR quantitative in real time.- QuantiGene System of Panomics.Measurement of plasmatic ACTH.The statistical study of the results was carried out using descriptive statistics for the demographic data and contrast statistics for comparing the means. In this longitudinal study of comparative data, the Friedman test was used.RESULTSPhase 1: PreoperativeThe value of POMC1 is not distributed normally, Median 6210 cycles and Interquartile Range 2550 cycles, Mean Rank (MR) 3,20.The plasmatic levels of ACTH have an mean value of 5,5 ± 2,7 Std Desviation (SD) pmol/L. Mean Rank (MR) AR 3,75Phase 2: Intra-operativeAfter intradural anaesthesia and sedation, the expression on RNAm of POMC in periferic limphocytes decreases in all patients and the plasmatic levels of ACTH lessen in patients in whom it was measured.POMC2 mean value 5637,25 ± 1205,78 SD cycles, MR 1,90ACTH2 mean value 2,762 ± 1,5146 SD pmol/L, MR 2,25Both values are statistically significant.What is most noticeable in our results is the decrease in the expression of the gene POMC and the plasmatic levels of ACTH in patients, in the time intervals between placing the intravenous catheter ( phase I ) and placing the central vein pressure catheter via the basilica vein (2nd sample, phase II). During this time the following is carried out:- Intradural anaesthesia with local anaesthetic and Methodone- Sedation- Surgical incisionThe above mentioned occurrence differs from other studies, where, albeit to a lesser extent in intradural anaesthesia as opposed to general anaesthesia, there exists an increase in the endocrine-metabolic response during the beginning of surgery.Phase 3: Immediate Post-operativeIn the post-surgical reanimation room, when the motor-sensitive block wore off, the ACTH values continued to decrease. In some patients they were almost impossible to detect, while the expression of POMC increased to values similar to those in phase I.POMC3 mean value 6558 ± 1878 SD cycles, MR 2,45ACTH3 median 1,3, Interquartile Range 2,5 MR 1,69Phase 4: Late Post-operative48 hours after surgical intervention, at 8.00 am, the plasmatic levels of ACTH rise, while the expression of POMC maintains values similar to those in Phase 3. The measurement of POMC in Phase 4, ignoring outlier values, tends to indicate higher values than those in Phase I.POMC4 median of 6215, interquartile range 2005 cycles, MR 2,45ACTH4 mean value 2,85 ± 1,84 SD pmol/L, MR 2,31CONCLUSIONS1 The surgical anaesthetic process involved certain stress levels which can be observed by measuring different parameters such as the plasmatic levels of ACTH and the expression of POMC in peripheral lymphocytes.2 During the 2nd, intra-operative phase, a decrease in the expression of POMC in peripheral lymphocytes and the plasmatic levels of ACTH also decrease. Both results are statistically significant. 3 During the immediate post-surgical recovery period (phase III) the plasmatic levels of ACTH are very low (in some cases undetectable), while the expression of POMC increases.4 48 hours after surgical intervention (phase IV), the values of POMC, (if we exclude extreme values 'outliers'), are higher that those found in the pre-operative phase (phase I), so the expression of the gene during the post-operative period, increases progressively. During this phase ACTH values also increase