Дослідження мебгідроліну хроматографічними методами

Topicality. Mebhydroline napadisylate (diazolin) – 3-methyl-9-benzyl-1,2,3,4-tetrahydrocarbolyn naphthalene-1,5- disulfonate – is a first-generation antihistamine, used for the prevention and treatment of seasonal and allergic rhinitis, food and drug allergies, dermatosis. With an overdose, mebhydroline affects the gastrointestinal tract, liver, central nervous system. According to toxicological studies, one of the leading places among medical poisoning is occupied by intoxication with antihistamines, due to multivectoral pharmacological effects, uncontrolled use as part of many combined medications for the treatment of seasonal diseases. The development of highly sensitive and selective methods for the study of mebhydroline suitable for analysis in biological objects is an actual problem.Aim. To develop an algorithm for the directed analysis of mebhydroline in biological extracts using unified methods of research by HPLC and TLC methods.Materials and methods. TLC studies were performed using 16 mobile solvent systems and three types of chromatographic plates. To identify the mebhydroline we applied universal visualization. HPLC studies were performed on a microcolumn liquid chromatograph “Milichrom A-02” in a reversed-phase variant using a metal column with a non-polar sorbent Prontosil 120-5C 18 AQ. Elution was performed in a linear gradient mode, the elution rate was 100 μl/min; column temperature – 40 ºС; pump pressure – 2.8-3.2 MPa; sample volume for input – 4 µl. Multichannel detection of the substance was performed using a two-beam multi-wavelength UV spectrophotometer at 8 wavelengths 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280 and 300 nm. Results and discussion. TLC conditions for purification of mebhydroline from biogenic impurities and its identification have been established. Based on the results of the studies, the behavior of mebhydroline by the HPLC method was studied. Identification was carried out using retention parameters, spectral relationships, and quantitative determination using the absolute calibration method. The method is validated by parameters – range of linearity, limit of detection and quantitative determination, accuracy and precision.Conclusions. The chromatographic behavior of mebhydroline by the TLC method was studied. The most suitable conditions (system of organic solvents – chromatographic plates) for identification and purification of mebhydroline from biogenic impurities were established: а) chloroform – acetone (80 : 20), Sorbfil PTLC-P-V-UV (Rf mebhydroline = 0.52 ± 0.03), Merck glass plates (Rf mebhydroline = 0.59 ± 0.03); b) methanol, Sorbfil PTLC-AF-A (Rf mebhydroline = 0.63 ± 0.03), Sorbfil PTLC-P-V-UV (Rf mebhydroline = 0.50 ± 0.03); c) benzene-ethanol-25 % ammonium hydroxide solution (80 : 20 : 1), glass plates produced by Merck (Rf mebhydroline = 0.63 ± 0.03). The identification parameters of mebhydroline under unified conditions of the HPLC method were established – the retention time was 21.17 ± 0.02 min; retention volume 2117.21 ± 0.34 μl; spectral ratio: 1.151; 0.717; 0.141; 0.089; 0.147; 0.024; 0.047. A technique has been developed for the quantitative determination of mebhydroline by HPLC method. It was established that the linearity range of the calibration curve is 50.0-200.0 µg/ml, which corresponds to the content of mebhydroline in the sample from 200.0 ng to 800.0 ng, respectively. The content of mebhydroline was determined by the equation S = 0.90 · 10-4 С + 1.05 · 10-3; correlation coefficient 0.9990. An algorithm for the directed analysis of biological extracts to mebhydroline using a combination of HPLC and TLC methods has been developed. Chromatographic techniques can be recommended for implementation in practice of the Bureau of Forensic Medical Examination, poison control centers, clinical laboratories regarding the study of medicinal substances in biological objects.Актуальность. Мебгидролин нападизилат (диазолин) – 3-метил-9-бензил-1,2,3,4-тетрагидрокарболину нафталин- 1,5-дисульфонат – антигистаминный препарат первого поколения, который применяется для профилактики и лечения сезонного и аллергического ринита, пищевой и медикаментозной аллергии, дерматозов. При передозировке мебгидролин поражает желудочно-кишечный тракт, печень, ЦНС. По данным токсикологических исследований одно из ведущих мест среди отравлений населения занимают интоксикации антигистаминными препаратами первого поколения, что обусловлено многовекторностью фармакологических эффектов, бесконтрольным применением в составе многих комбинированных препаратов для лечения сезонных заболеваний. Разработка высокочувствительных и селективных методик исследования мебгидролина, пригодных для анализа в биологических объектах, является актуальной проблемой.Целью исследования является разработка алгоритма направленного анализа мебгидролина в биологических экстрактах с применением унифицированных методик исследования ВЭЖХ- и ТСХ-методами.Материалы и методы. ТСХ-исследование проводили при использовании 16 систем подвижных растворителей и трех типов хроматографических пластинок. Для идентификации мебгидролина применяли универсальные условия визуализации. ВЭЖХ-исследования проводили на микроколоночном жидкостном хроматографе «Милихром А-02» в обращенно-фазном варианте при использовании металлической колонки с неполярным сорбентом Prontosil 120-5C 18 AQ. Элюирование проводили в режиме линейного градиента, скорость элюирования составляла 100 мкл/мин; температура колонки – 40 ºС; давление насоса – 2,8-3,2 MPa; объем пробы для ввода – 4 мкл. Многоканальное детектирование вещества проводили с использованием двухлучевого мультиволнового УФ-спектрофотометра по 8 значениям длины волны 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280 и 300 нм.Результаты и их обсуждение. Установлены ТСХ-условия для очистки мебгидролина от биогенных примесей и его идентификации. По результатам исследований изучено поведение мебгидролина ВЭЖХ-методом. Проведены идентификация по параметрам удерживания и спектральным отношениям и количественное определение методом абсолютной калибровки. Методика валидирована по параметрам – диапазон линейности, пределы обнаружения и количественного определения, правильности и точности. Выводы. Изучено хроматографическое поведение мебгидролина ТСХ-методом. Установлены наиболее пригодные условия (система органических растворителей – хроматографические пластинки) для идентификации и очистки мебгидролина от биогенных примесей: а) хлороформ – ацетон (80 : 20), Сорбфил ПСТХ-П-В-УФ (Rf мебгидролина = 0,52 ± 0,03), стеклянные пластинки фирмы «Мерк» (Rf мебгидролина = 0,59 ± 0,03); б) метанол, Сорбфил ПСТХ-АФ-А (Rf мебгидролина = 0,63 ± 0,03), Сорбфил ПСТХ-П-В-УФ (Rf мебгидролина = 0,50 ± 0,03); в) бензол-этанол-25 % раствор аммония гидроксида (80 : 20 : 1), стеклянные пластинки фирмы «Мерк» (Rf мебгидролина = 0,63 ± 0,03). Установлены параметры идентификации мебгидролина при унифицированных условиях ВЭЖХ-метода – время удерживания – 21,17 ± 0,02 мин; объем удерживания – 2117,21 ± 0,34 мкл; спектральные отношения: 1,151; 0,717; 0,141; 0,089; 0,147; 0,024; 0,047. Разработана методика количественного определения мебгидролина ВЭЖХ-методом. Установлено, что диапазон линейности градуировочного графика – 50,0-200,0 мкг/мл, что соответствует содержанию мебгидролина в пробе от 200,0 нг до 800,0 нг соответственно. Определение содержания мебгидролина проведено по уравнению S = 0,90 · 10-4 С + 1,05 · 10-3; коэффициент корреляции – 0,9990. Разработан алгоритм направленного анализа биологических экстрактов на мебгидролин при сочетании ВЭЖХ- и ТСХ-методов. Хроматографические методики могут быть рекомендованы для внедрения в практику бюро судебно-медицинской экспертизы, токсикологических центров, клинических лабораторий относительно изучения лекарственных веществ в биологических объектах.Актуальність. Мебгідроліну нападизилат (діазолін) – 3-метил-9-бензил-1,2,3,4-тетрагідрокарболіну нафталін-1,5-дисульфонат – антигістамінний препарат першого покоління, який застосовується для профілактики і лікування сезонного та алергічного риніту, харчової та медикаментозної алергії, дерматозів. При передозуванні мебгідролін вражає шлунково-кишковий тракт, печінку, ЦНС. За даними токсикологічних досліджень одне з провідних місць серед отруєнь населення посідають інтоксикації антигістамінними препаратами першого покоління, що зумовлено багатовекторністю фармакологічних ефектів, безконтрольним застосуванням у складі багатьох комбінованих препаратів для лікування сезонних захворювань. Розробка високочутливих та селективних методик дослідження мебгідроліну, придатних для аналізу у біологічних об’єктах, є актуальною проблемою.Метою дослідження є розробка алгоритму спрямованого аналізу мебгідроліну у біологічних екстрактах із застосуванням уніфікованих методик дослідження ВЕРХ- і ТШХ-методами.Матеріали та методи. ТШХ-дослідження проводили при застосуванні 16 систем рухомих розчинників і трьох типів хроматографічних пластинок. Для ідентифікації мебгідроліну використовували універсальні умови візуалізації. ВЕРХ-дослідження проводили на мікроколоночному рідинному хроматографі «Міліхром А-02» в обернено-фазному варіанті при застосуванні металевої колонки з неполярним сорбентом Prontosil 120-5C 18 AQ. Елюювання проводили у режимі лінійного градієнту, швидкість елюювання складала 100 мкл/хв; температура колонки – 40 °С; тиск насосу – 2,8-3,2 MПa; об’єм проби для введення – 4 мкл. Багатоканальне детектування речовини проводили із застосуванням двопроменевого мультихвильового УФ-спектрофотометра за 8 значеннями довжини хвилі: 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280 та 300 нм.Результати та їх обговорення. Встановлені ТШХ-умови для очистки мебгідроліну від біогенних домішок та його ідентифікації. За результатами досліджень вивчено поведінку мебгідроліну ВЕРХ-методом. Проведено ідентифікацію за параметрами утримування і спектральними відношеннями та кількісне визначення за методом абсолютного калібрування. Методика валідована за параметрами – діапазон лінійності, межі виявлення та кількісного визначення, правильності та прецизійності.Висновки. Вивчено хроматографічну поведінку мебгідроліну ТШХ-методом. Встановлені найбільш придатні умови (система органічних розчинників – хроматографічні пластинки) для ідентифікації та очистки мебгідроліну від біогенних домішок: а) хлороформ – ацетон (80 : 20), Сорбфіл ПСТХ-П-В-УФ (Rf мебгідроліну = 0,52 ± 0,03), скляні пластинки фірми «Мерк» (Rf мебгідроліну = 0,59 ± 0,03); б) метанол, Сорбфіл ПСТХ-АФ-А (Rf мебгідроліну = 0,63 ± 0,03), Сорбфіл ПСТХ-П-В-УФ (Rf мебгідроліну = 0,50 ± 0,03); в) бензин-етанол-25 % розчин амонію гідроксиду (80 : 20 : 1), скляні пластинки фірми «Мерк» (Rf мебгідроліну = 0,63 ± 0,03). Встановлені параметри ідентифікації мебгідроліну за уніфікованими умовами ВЕРХ-методу – час утримування – 21,17 ± 0,02 хв; об’єм утримування – 2117,21 ± 0,34 мкл; спектральні відношення: 1,151; 0,717; 0,141; 0,089; 0,147; 0,024; 0,047. Розроблено методику кількісного визначення мебгідроліну ВЕРХ-методом. Встановлено, що діапазон лінійності градуювального графіка – 50,0-200,0 мкг/мл, що відповідає вмісту мебгідроліну в пробі від 200,0 нг до 800,0 нг відповідно. Визначення вмісту мебгідроліну проведено за рівнянням S = 0,90 · 10-4 С + 1,05 ·10-3; коефіцієнт кореляції – 0,9990. Розроблено алгоритм спрямованого аналізу біологічних екстрактів на мебгідролін при сполученні ВЕРХ- та ТШХ-методів. Хроматографічні методики можуть бути рекомендовані для впровадження у практику бюро судово-медичної експертизи, токсикологічних центрів, клінічних лабораторій відносно вивчення лікарських речовин у біологічних об’єктах