Predição e caracterização de um epítopo conformacional da crotoxina, uma neurotoxina presente no veneno da serpente Crotalus durissus terrificus

Trabalho de Conclusão de Curso, apresentado para obtenção do grau de Bacharel no curso de Biomedicina da Universidade do Extremo Sul Catarinense, UNESC.A serpente Crotalus durissus terrificus pertencente à família Viperidae é a espécie mais amplamente distribuída pela América do Sul e responsável pelo maior coeficiente de letalidade. Dentre as toxinas que compõe o veneno, a que apresenta maior atividade tóxica e que representa 65% da sua composição é a crotoxina. Na ocorrência de acidentes o tratamento preconizado pelo Ministério da Saúde é a Imunoterapia que utiliza soros produzidos em cavalos para neutralizar a ação do veneno. Porém, a dificuldade em se obter um soro puro e em grande escala, torna necessária a busca por alternativas através de moléculas que apresentam o mesmo efeito da crotoxina. Os epítopos, também conhecidos como determinantes antigênicos, podem ser definidos como um grupo de aminoácidos derivados de antígenos proteicos, que podem interagir com receptores de células B ou com os receptores de célula T, resultando em uma resposta imune. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi desenvolver uma molécula que tenha capacidade de ligar-se ao soro comercial anticrotálico. Foi realizada a caracterização e síntese de epítopos conformacionais da crotoxina, através de ferramentas de bioinformática e síntese in vitro de peptídeos utilizando a técnica de Fmoc. Esse epítopo na forma de peptídeo foi utilizado como antígeno para realização do teste de ELISA. Nossos resultados em relação à predição molecular realizada através de programas de bioinformática demonstraram que o peptídeo da crotoxina encontra-se exposto na superfície da molécula sendo acessível à ligação de anticorpos. Em relação aos resultados obtidos pelo teste de ELISA, observamos que o peptídeo sintetizado foi capaz de reconhecer o soro anticrotálico. Em virtude disto, o modelo tridimensional da crotoxina, mostrou-se confiável, resultando em um epítopo neutralizante, sendo então considerado uma molécula capaz de ser utilizada no sorodiagnóstico de acidentes com a serpente Crotalus durissus terrificus