Optimalisasi teknik PCR dengan primer 4 dan 6 pada Gen APO B-100

Penelitian genetika dan molekuler telah memberikan banyak manfaat terhadap bidang kedokteran, khususnya dalam menemukan suatu penyakit yang disebabkan oleh mutasi gen tertentu dalam tubuh manusia. Gen apo B-100 merupakan gen yang bertanggung jawab sebagai ligan LDL, yang apabila mengalami mutasi akan menimbulkan kelainan genetik berupa penyakit hiperkolesterolemia. Untuk mempermudah deteksi terjadinya mutasi pada gen tersebut perlu dilakukan perbanyakan urutan DNA yang mengalami mutasi. Perbanyakan urutan DNA dapat dilakukan dengan menggunakan teknik PCR (Polymerase Chain Reaction), yaitu suatu teknik amplifikasi DNA yang dilakukan secara in vitro. Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pita DNA Apo B-100 dengan kualitas yang baik pada suhu annealing tertentu menggunakan primer PCR 4 dan 6, serta untuk mengetahui suhu annealing optimum pada teknik PCR untuk proses amplifikasi DNA target, yaitu gen apo B-100. Penelitian ini akan berguna untuk kepentingan penelitian penyakit hiperkolesterolemia selanjutnya. Pada penelitian ini, dilakukan optimasi suhu annealing pada teknik PCR dengan menggunakan DNA yang diisolasi dari sampel darah manusia. Suhu optimasi yang digunakan sebanyak 5 suhu yang berbeda, yaitu 52oC, 53oC, 54oC, 55oC dan. 56oC. DNA yang telah diisolasi dari sel darah putih manusia diperbanyak dengan teknik PCR. DNA hasil amplifikasi dengan PCR kemudian dielektroforesis, untuk mengetahui adanya DNA hasil PCR yang berupa pita. Dari hasil elektroforesis, diketahui bahwa terdapat dua pita DNA tebal dan terang, yang menunjukkan bahwa pada suhu annealing 54oC dan 55oC, amplifikasi DNA bekerja dengan optimum. Pada suhu annealing 52oC dan 53oC DNA hasil PCR hanya berupa pita yang tipis dan kurang begitu tebal, menandakan bahwa reaksi amplifikasi bekerja kurang optimum. Pada suhu annealing 56oC, tidak terdapat hasil amplifikasi DNA. DNA hasil elektroforesis yakni berukuran 400-500 bp, merupakan DNA apo B-100 hasil amplifikasi dengan menggunakan primer 4 dan 6. Kata Kunci