Atividade antimicrobiana e antitríptica das proteínas de sementes do quiabo (Abelmoschus esculentus L. MOENCH)

Studies with protease inhibitors have been the subject of continuous interest of researchers, mainly due to potential biological activities, such as: antioxidant, insecticidal, antifungal and antimicrobial activity. The presence of trypsin inhibitors in some plants may limit their use in human food; mainly due to its effects of reduction in protein digestibility. In animals fed soybean and bean seeds that have protease inhibitors, the growth and hypertrophic response of the pancreas and small intestine has been scientifically demonstrated. Based on this, this work aimed to investigate and characterize new trypsin inhibitors present in okra (Abelmoschus esculentus L. Moench) seeds. Thus, after extraction with water, the crude protein extract (EB) obtained was precipitated with ammonium sulfate in a single fractionation in the range of 0-80%. The resulting fraction was subjected to inhibitory activity assay and ion exchange chromatography to purify the inhibitors. The soluble protein contents in the research steps were quantified by the Bradford method and visualized by electrophoresis (PAGE-SDS). The quantification of the soluble protein content showed a considerable protein content, being these levels similar to those found in bean seeds. Regarding the antitríptic activity, high values of inhibition of the enzyme trypsin were found in the EB and SF (supernatant of fraction 0-80), with 75.8% and 97.1%, respectively. In the ion exchange chromatography of the supernatant of the fraction, four peaks were obtained by elution in a gradient of NaCl concentration (0-0.4 mol / L). The electrophoresis analysis (PAGE-SDS) of the crude extract. fractions and chromatographic peaks showed that EB, SF and PF (0-80% fraction precipitate) presented protein bands in the range between 38 and 12 kDa and of 76 kDa. EB, SF and PF were positive in antimicrobial growth inhibition test of Candida sp. the chromatographic peaks on the other hand show a negative result for such tests. Thus, it was concluded that okra seeds have a high content of proteins as well as trypsin inhibitors, which were partially purified, justifying the continuity of the research in order to purify these inhibitors, as well as to verify their probable biological activities.Estudos com inibidores de proteases vêm sendo alvo de contínuo interesse de pesquisadores, sobretudo devido as potenciais atividades biológicas, tais como: antioxidante, atividade inseticida, antifúngica e antimicrobiana. A presença de inibidores de tripsina em algumas plantas pode limitar seu uso na alimentação humana; sobretudo devido aos seus efeitos de redução na digestibilidade de proteínas. Em animais alimentados com sementes de soja e feijão, que apresentam inibidores de proteases, já foi demonstrada cientificamente a redução no crescimento e resposta hipertrófica do pâncreas e intestino delgado. Com base nisso, este trabalho teve como objetivo investigar e caracterizar novos inibidores de tripsina presentes nas sementes de quiabo (Abelmoschus esculentus L. Moench). Assim, após extração feita com água, o extrato bruto (EB) proteico obtido foi precipitado com sulfato de amônio em um único fracionamento na faixa de 0-80%. A fração resultante foi submetida a ensaio de atividade inibitória e cromatografia de troca iônica visando purificar os inibidores. Os teores de proteínas solúveis nas etapas de investigação foram quantificados pelo método de Bradford e visualizados por meio de eletroforese (PAGE-SDS). A quantificação do teor de proteínas solúveis mostrou a existência de um teor considerável de proteínas, sendo estes teores semelhantes aos encontrados nas sementes de feijão. No que diz respeito à atividade antitríptica, elevados valores de inibição da enzima tripsina foram encontrados no o EB e o SF (sobrenadante da fração 0-80), com 75,8% e 97,1%, respectivamente. Na cromatografia de troca iônica do sobrenadante da fração foram obtidos, por eluição em gradiente de concentração de NaCl (0-0,4mol/L), quatro picos. A análise por eletroforese (PAGE-SDS) do extrato bruto. frações e picos cromatográficos mostrou que o EB, SF e PF (precipitado da fração 0-80%) apresenta bandas proteicas na faixa entre 38 e 12 kDa e de76 kDa. EB, SF e PF foram positivos em teste de inibição de crescimento antimicrobiano de cepas de Cândida sp. os picos cromatográficos por outro lado demostram resultado negativo para tais testes. Dessa forma, concluiu-se que sementes de quiabo apresentam um considerável teor de proteínas como também, inibidores de tripsina, que foram parcialmente purificados, justificando a continuidade da pesquisa visando à purificação desses inibidores, bem como, verificação de suas prováveis atividades biológicas