Avaliação da atividade antimicrobiana da terapia Fotodinâmica sobre a inativação de espécies do gênero Candida: estudo in vitro

Candida species are part of the commensal microbiota of the oral cavity of most healthy individuals. The emergence of new species of Candida and the selection of lines tolerant to conventional antifungal agents stimulates the development of new therapies for the treatment of infections caused by species of Candida. In this context stands the photodynamic therapy (PDT) which is capable of killing fungal cells by administration of a photosensitizing substance followed by the application of light in the visible wavelength. This study evaluated, in vitro, the efficacy of PDT in photoinactivation of Candida species (C. albicans, C. krusei, C. tropicalis and C. guilhermondii) using the photosensitizing agent methylene blue (150&#956;g/ml) and irradiation with a diode laser operating in the visible red (&#654;660nm, 40mW). Initially, the tested microorganisms were inoculated in test tubes containing liquid culture medium and incubated overnight at 37°C. Then cell s uspensions were obtained containing 106 cfu / ml. These suspensions were transferred to 96-holes plates and exposed to 03 doses of laser light (Group 1- 60J/cm2 (2,4J), Group 2- 120J/cm2 (4,8J), Group 3-180J/cm2 (7,2J)). Additional suspensions were treated with only the photosensitizer, with only the laser light or with 0.85% saline (control group). Each experimental condition was performed twice. After the treatments, 1&#956;l aliquots of the suspensions were plated on Sabouraud Dextrose Agar. The plates were incubated at 37°C for 24-48h and after this period there was the counting of colonies (cfu / ml). The three doses evaluated determined significant inactivation of Candida spp. (P <0.05). The 180J/cm2 dose was the most effective, inactivating 78% of cfu/ml followed by doses of 120J/ cm2 and 60J/cm2 with inactivation average of 62% and 42% respectively. A statistically significant difference between the rates of inactivation of C. albicans, C.krusei, C. tropicalis and C. guilhermomdii at doses of 60 J/cm2 and 120 J/cm2 (p> 0.05) was not verified. However, at a dose of 180 J/cm2 C. albicans was the most susceptible species to the effects of PDT. We conclude that photodynamic therapy (PDT) has demonstrated effectiveness in the inactivation of Candida spp.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorAs espécies de Candida fazem parte da microbiota comensal da cavidade bucal da maioria dos indivíduos saudáveis.. A emergência de novas espécies de Candida e a seleção de linhagens tolerantes aos antifúngicos convencionais estimula o desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas para o tratamento das infecções causadas por espécies de Candida.Nesse contexto destaca-se a terapia fotodinâmica (TFD) que é capaz de eliminar células fúngicas através da administração de uma substância fotosensibilizadora seguido da aplicação de luz em comprimento de onda visível e compatível. Este estudo avaliou, in vitro, a eficácia da TFD na fotoinativação de espécies do gênero Candida (C. albicans, C. krusei, C. tropicalis e C. guilhermondii) por meio do agente fotossensibilizador azul de metileno (150&#956;g/ml) e da irradiação com um Diodo Laser (660nm, 40mW)). Inicialmente os microrganismos avaliados foram inoculados em tubos de ensaio contendo meio de cultura líquido e incubados overnight a 37°C. Em seguida foram obtidas suspensões celulares contendo 106 ufc/ml, as quais foram transferidas para placas de 96 orifícios e expostas a 03 doses de luz Laser (Grupo1- 60J/cm2 (2,4J), Grupo2- 120J/cm2 (4,8J), Grupo 3-180J/cm2 (7,2J). Suspensões adicionais foram tratadas apenas com o fotossensibilizador, apenas com a luz Laser ou com solução salina 0,85% (grupos controle). Cada condição experimental foi realizada 2 vezes. Após a aplicação dos tratamentos, alíquotas de 1&#956;l das suspensões foram plaqueadas em Agar Sabouraud Dextrose. As placas foram incubadas a 37°C por 24-48h e após esse período foi realizada a contagem das colônias (ufc/ml). As três doses avaliadas determinaram inativação significativa de Candida spp. (p<0,05). A dose de 180J/cm2 foi a mais eficaz, inativando 78% das ufc seguida pelas doses de 120J/ cm2 e 60J/cm2 com inativação média de 62% e 42% respectivamente. Não foi verificada diferença estatística significativa entre as taxas de inativação de C.albicans, C.krusei, C. tropicalis e C. guilhermomdii nas doses de 60 J/cm2 e 120 J/cm2 (p> 0,05). No entanto, na dose de 180 J/cm2 C. albicans foi a espécie mais susceptível aos efeitos da TFD. Conclui-se que a terapia fotodinâmica (PDT) demonstrou efetividade na inativação de Candida spp