Gene variants associated with venous thrombosis : a replication study in a multicenter brazilian study  

Orientador: Joyce Maria Annichino BizzacchiDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: Introdução: O Tromboembolismo Venoso (TEV) é uma doença multifatorial resultante da exacerbação da resposta hemostática normal no sistema vascular venoso. Recentemente foram identificados polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) associados ao risco de TEV, apesar de um baixo grau de significância, em populações européias e americanas. Objetivos: Replicar SNPs associados ao TEV em um estudo multicêntrico caso-controle brasileiro. Identificar a ocorrência de estratificação na população estudada. Avaliar em um subgrupo de pacientes a correlação entre alguns SNPs e a atividade plasmática de fatores e inibidores da coagulação a eles associados. Material/Métodos: Foram selecionados pacientes com antecedente de TEV, acompanhados no período de 2009 a 2013, em ambulatórios de trombofilia de 3 centros da região sudeste brasileira (Hemocentro da UNICAMP, Campinas-SP / Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro-RJ / Hospital Israelita Albert Einstein, São Paulo-SP), e controles normais da mesma região geográfica, pareados por idade e sexo. Os critérios de exclusão foram: idade inferior a 18 anos e superior a 60 anos, história de câncer nos 5 últimos anos, anticorpos antifosfolípides, doenças renal, hepática, inflamatória ou mieloproliferativa, deficiência de proteína C e S, antitrombina, homozigose para FV Leiden ou polimorfismo G20210A no gene da protrombina. Foram avaliados 29 SNPs, previamente associados a risco de TEV em outras populações, e 91 SNPs para análise de estratificação da população. Pela alta miscigenação da população brasileira e falta de estudos prévios, o cálculo do poder amostral foi realizado após a genotipagem. Em uma parcela das amostras do Hemocentro da Unicamp foram quantificados fatores de coagulação (FV, FVIII, FXI, FvW), antitrombina, proteína C e S, para correlação com os SNPs correspondentes. O cálculo do tamanho amostral foi realizado utilizando o software GPOWER v.3.1. A frequência alélica e o equilíbrio de Hardy-Weinberg foram estimados pelo software PLINK v.1.07. A análise de associação e odds ratio foram estimados por regressão logística e os resultados foram ajustados para múltiplos testes usando a correção de Bonferroni. A avaliação da similaridade da estrutura genética dos casos e controles foi realizada por meio de uma AMOVA (ARLEQUIN v3.5.1.2 software). Resultados: Neste estudo caso-controle foram incluídos 436 casos e 430 controles, e demonstrou-se que esta amostra apresenta um poder estatístico de detectar associação genética de 79,4%. A AMOVA mostrou que a variabilidade genética entre os grupos foi de 0,0% e em cada grupo foi de 100%. Nenhum dos SNPs mostrou associação com TVP. Conclusões: Em um estudo multicêntrico caso-controle brasileiro com adequado poder amostral, com elevada variabilidade genética, mas sem estratificação entre os grupos, não houve replicação de SNPs associados ao TEV. A alta miscigenação da população brasileira pode ser responsável por esses resultados, enfatizando a influência da estrutura genética populacional em estudos de associaçãoAbstract: Introduction: Venous thromboembolism (VTE) is a multifactorial disease resulting from the exacerbation of the normal hemostatic response in the venous vascular system. Recently, single nucleotide polymorphisms (SNP) associated with VTE risk have been identified, but with a low degree of significance, in European and American populations. Objectives: To Replicate SNPs associated with VTE in a multicenter Brazilian case-control study. To identify the occurrence of stratification in the population studied. To evaluate in a subgroup of patients the correlation between some SNPs and the plasmatic activity of coagulation factors and inhibitors associated with them. Material/Methods: Patients with a history of VTE were selected, followed in the period 2009 to 2013, in thrombophilia outpatient clinics of 3 centers of the southeastern Brazilian region (Blood Center of UNICAMP, Campinas-SP / Federal University of Rio de Janeiro (UFRJ), Rio de Janeiro-RJ / Hospital Israelita Albert Einstein, São Paulo-SP), and normal controls of the same geographic region, paired by age and sex. Exclusion criteria were: age below 18 years and higher than 60 years, history of cancer in the last 5 years, antiphospholipid antibodies, renal disease, hepatic, inflammatory or myeloproliferative, protein C and S deficiency, antithrombin, homozygosity / duble heterozygosity for FV Leiden, or G20210A polimorfism in the prothrombin gene. We evaluated 29 SNPs, previously associated with VTE risk in other populations, and 91 SNPs for stratification analysis of the population. Due to the high miscigenation of the Brazilian population and lack of previous studies, the calculation of the sample power was performed after genotyping. Coagulation factors (FV, FVIII, FXI, FvW), antithrombin, protein C and S were quantified for correlation with corresponding SNPs in a portion of the Blood Center of Unicamp samples. The sample size calculation was performed using the GPOWER v. 3.1 software. The allelic frequency and Hardy-Weinberg equilibrium were estimated BY PLINK v. 1.07 software. The analysis of association and odds ratio were estimated by logistic regression and the results were adjusted for multiple tests using Bonferroni correction. The evaluation of the similarity of the genetic structure of the cases and controls was performed by AMOVA (ARLEQUIN v 3.5.1.2 software). Results: In this case-control study, 436 cases and 430 controls were included, and it was demonstrated that this sample has a statistical power to detect a genetic association of 79.4%. AMOVA showed that the genetic variability between the groups was 0.0% and, in each group, it was 100%. None of the SNPs showed association with DVT. Conclusions: In a multicentre Brazilian case-control study with adequate sample power, with high genetic variability but without stratification between groups, there was no replication of SNPs associated with VTE. The high miscegenation of the Brazilian population may be responsible for these results, emphasizing the influence of the population genetic structure in association studiesMestradoFisiopatologia MédicaMestra em CiênciasCAPE