Pterodon pubescens Benth : evaluation os the synergistic effect of vouacapans and geranylgeraniol on anti-inflammatory, antinoceptive and antiulcerogenic activity in vivo  

Orientador: Mary Ann FoglioTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: Extratos vegetais possuem diversos compostos que podem interagir, simultaneamente, em múltiplos alvos promovendo uma resposta biológica benéfica ou nociva. Sendo assim, torna-se indispensável estudos que visam identificar quais são os compostos ou classe de compostos envolvidos com a resposta farmacológica. Os frutos da espécie Pterodon pubescens Benth. (Sucupira) são amplamente utilizados na medicina popular para o tratamento de doenças inflamatórias. Os efeitos anti-inflamatório e antinociceptivo dessa espécie já foram evidenciados em diversos estudos in vivo e essa atividade foi atribuída à presença dos diterpenos furânicos e geranilgeraniol que aparentam atuar sinergicamente promovendo uma melhor atividade. Por outro lado, não existem estudos que avaliaram qual o efeito desses compostos na mucosa gástrica (principal reação adversa ao uso dos anti-inflamatórios). Com base nisso, o presente trabalho teve como objetivo avaliar as possíveis interações entre os compostos presentes no extrato diclorometano dos frutos P. pubescens Benth. na atividade antinociceptiva além de avaliar a ação desses compostos na mucosa gástrica. Os estudos de interação entre os compostos foram iniciados a partir do fracionamento do extrato bruto diclorometano dos frutos de P. pubescens (Pp) e caracterização química de suas frações (CG-DIC e CLAE-UV/VIS), as interações foram avaliadas no modelo de contorção abdominal induzido por ácido acético em camundongos swiss seguido das análises pelo método do isobolograma e índice de correlação (IC). O efeito do tratamento com Pp, frações e a mistura dos isômeros 6?-hidroxi-7?-acetoxi-vouacapano-17?-oato de metila e éster 6?-acetoxi-7?-hidroxi-vouacapano-17?-oato de metila (m/z 404) na mucosa gástrica foi avaliado avaliada em ratos wistar nos modelos de úlcera gástrica induzido por etanol, anti-inflamatório não esteroidal, secreção gástrica (amarradura de piloro) e secreção de muco. Também foi avaliado a influência desses compostos nas vias de proteção gástrica como os compostos sulfidrílicos, óxido nítrico e prostaglandinas. O fracionamento do extrato bruto diclorometano três frações de diferentes polaridades, fração A (Fr A - cerca de 11% de compostos sesquiterpênicos), fração B (Fr B - cerca de 2% do composto geranilgeraniol) e fração C (Fr C - cerca de 25% de diterpenos furânicos). Todas as frações reduziram significativamente via dose dependente as contorções abdominais induzidas por ácido acético com ED50 fração A (102,34 mg/kg v.o), fração B (101,96 mg/kg v.o) e fração C (63,83 mg/kg v.o - ANOVA p <0,05). A análise isobolográfica permitiu a caracterização da interação farmacológica produzida por uma combinação de proporção fixa de 3:1, 1:1 e 1:3 destas frações. Os valores de ED50 e IC da mistura Fr A e Fr C, foram, respectivamente, 126,73 (IC:1,37); 69,96 (IC 0,84) e 57,91 (IC 0,70) mg/kg (ANOVA p <0,05), indicando interações de antagonismo moderado e sinérgicas fracas. Já os valores de ED50 e IC da mistura Fr B e Fr C, foram, respectivamente, 68,53 (IC:0,74); 41,51 (IC:0,50) e 37,21(IC:0,50) mg/kg (ANOVA p <0,05), respectivamente indicando interações sinérgicas. A inibição do extrato diclorometano de mais de 90 % (ANOVA p <0,05) das lesões gástricas induzidas por etanol estimularam os estudos para avaliar quais as possíveis vias de ação dos compostos presentes no extrato. A ação da fração A pode estar relacionada com a diminuição da secreção gástrica. Já a atividade do Pp e frações B e m/z 404 parecem estar relacionado com a vias dos compostos sulfidríticos e síntese de prostaglandinas. E por fim, a atividade antinociceptiva do extrato bruto diclorometano dos frutos de P. pubescens depende das interações farmacológicas dos compostos sesquiterpênicos, geranilgeraniol e vouacapânicos presentes nesse extrato e que esses compostos também estão relacionados com a atividade antiulcerogênica da espécieAbstract: Plant extracts have several compounds that can interact simultaneously in different targets promoting a benefical or harmful biological response. Therefore, studies assessing these interactions and which compounds or class of compounds involved in the effect are indispensable. Pterodon pubescens Benth. (Sucupira) fruit's are widely used in folk medicine for the treatment of inflammatory diseases. The anti-inflammatory and antinociceptive effect of this species have already been evidenced in several in vivo studies and its activity was attributed to the presence of furan and geranylgeraniol diterpenes that appear to act synergistically promoting a better activity.On the other hand, there are no studies evaluating the effect of these compounds on the gastric mucosa (the main adverse reaction to the use of anti-inflammatories).Then the aim of this work was to determine which are the compounds involved directly or indirectly with antinociceptive activity besides evaluating its action on the gastric mucosa. The interaction studies between the compounds were started from the fractionation of the P.pubescens Benth fruits dichloromethane extract and chemical characterization of their fractions (GC-FID and HPLC UV / Vis), the interactions were evaluated in the acetic acid-induced writhing model followed by the isobologram and correlation index (CI) analysis. The effect of the treatment with Pp, fractions and the mixture of the isomers of methyl 6?-hydroxy-7?-acetoxy-vouacapan-17?-oate and methyl ester 6?-acetoxy-7?-hydroxy-vouacapan-17?-oate (m / z 404) in gastric mucosa was evaluated in the models of gastric ulcer induced by ethanol, non-steroidal anti-inflammatory (acute and chronic), gastric secretion and mucus secretion. The influence of these compounds on gastric protection routes such as sulfhydryl compounds, nitric oxide and prostaglandins were also evaluated. Fractionation of the crude dichloromethane extract afforded three fractions of different polarities, fraction A (Fr A ¿ with approximately 11% sesquiterpene compounds), fraction B (with approximately 2% of the geranylgeraniol compound) and fraction C (Fr C - with approximately 25% of furan diterpenes).All sample treatments decreased significantly in a dose dependent manner the writhing behavior with ED50 values of 102,34; 101,96; and 63,83 mg/kg, for sesquiterpene, geranylgeraniol and vouacapan fraction, respectively (ANOVA p < 0.05). An isobolographic analysis allowed the characterization of the pharmacological interaction produced by a fixed ratio combination of 3:1, 1:1 and 1:3 of equi-effective doses of these compounds. The antinociceptive ED50 and CI values of FrA e FrC fraction 126,73 (CI: 1,37); 69,96 (CI: 0,84) and 57,91 (CI: 0,70) mg/kg (ANOVA p <0.05), respectively. These results showed that: in the 3:1 proportion there was an antagonic interaction of these compounds and that in the 1:1 and 1:3 proportion there was a synergic interaction. The antinociceptive ED50 and CI values of FrB e FrC fraction 68,53 (CI: 0,74); 41,51 (CI: 0,50) and 34,21 (CI: 0,50) mg/kg (ANOVA p < 0.05), respectively. Reporting synergic interaction for this fractions associations. The inhibition of the dichloromethane extract of more than 90% of gastric lesions induced by ethanol (ANOVA p