Microorganisms and their virulence factors detection in saliva, pulp chamber and root canal of teeth associated with endodontic failure

Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida GomesDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Na microbiota de infecções secundárias/persistentes predominam micro-organismos resistentes aos procedimentos endodônticos, destacando-se entre eles Enterococcus faecalis. A microinfiltração coronária é um agente etiológico do insucesso do tratamento endodôntico, promovendo uma fonte constante de contaminação da saliva para os canais radiculares. Os objetivos do presente estudo foram: a) estudar a composição da microbiota da saliva (S), câmara pulpar (CP) e canal radicular (CR) de dentes com insucesso endodôntico, por meio da técnica de checkerboard, de maneira a verificar a simultaneidade entre as espécies bacterianas presentes nestes três sítios; b) quantificar os níveis de lipopolissacarídeos (LPS) e ácido lipoteicóico (LTA) presentes na S, CP e CR investigados; c) correlacionar as bactérias encontradas entre os sítios, dentro dos sítios e com o LPS/LTA; d) correlacionar os micro-organismos e o LPS/LTA com os aspectos clínicos dos pacientes. Foram selecionados 20 dentes com presença de lesão periapical e necessidade de retratamento endodôntico. Amostras foram coletadas da saliva, câmara pulpar e canal radicular. O DNA destas foi extraído e submetido ao método do checkerboard utilizando sondas para 40 espécies diferentes. As amostras de LPS e LTA foram quantificadas pelos métodos Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) e Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), respectivamente. Bactérias foram detectadas em todas as amostras, tanto Gram-positivas quando Gram-negativas, anaeróbias facultativas e estritas, com média do número de espécies de 35, 20, e 29, para S, CP e CR, respectivamente. As bactérias mais prevalentes, encontradas simultanemanete nos 3 sítios estudados foram: E. faecium, P. micra, F. nucleatum sp. nucleatum, E. faecalis, E. saburreum e C. ochracea. O LPS e o LTA estiveram presentes em 95% e 100% das amostras do CR, com média de 3,26 EU/mL e 578,67 pg/mL. Associações altamente significativas positivas e negativas (p 2 ou 2 or <0.5. A positive statistical association (p <0.05) between the sites of the teeth showing signs of microleakage (11/20) was found between S. oralis from S and S. oralis from RC (p = 0.015 and ODDS = 7). In the teeth that did not show signs of microleakage (9/20) a negative association was found between C. showae of PC and C. showae from RC (p = 0.048 and ODDS = 0.250). There were four positive associations between the Gram-negative bacteria concentration and the LPS (V. parvula-PC/LPS-S, C. showae-PC/LPS-S and C. ochracea-PC/LPS-RC), and two negative (F. nucleatum sp. nucleatum-PC/LPS-PC and D. pneumosintes-RC/LPS-RC) (p <0.01). Between the Gram-positive bacteria concentration and the LTA, there were one positive association (E. hirae-RC/LTA-PC) and three negative (all at PC between LTA and E. nodatum, S. mitis and E. nodatum) (p <0.01). With regard to correlations with the clinical aspects of patients, three significant negative associations (p