Involvement of the colinergic anti-inflammatory via in the effects of docosahexaenoic (DHA) fatty acid during wound healing

Orientador: Hosana Gomes RodriguesDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências AplicadasResumo: A cicatrização é um evento fisiológico essencial para a manutenção da vida. Sua fase inicial, a inflamatória, é de suma importância e pode ser modulada por diversos mecanismos, como pela ação dos ácidos graxos poliinsaturados ômega 3. Atualmente, têm sido descritos também outros sistema nervoso central (SNC) interagindo com o sistema imune (SI) para modular a resposta inflamatória. Essa comunicação atua através do nervo vago, o qual libera acetilcolina que irá atuar, via receptor 'alfa'-7 nicotínico, em células como macrófagos. Assim, considerando que a resposta inflamatória é uma parte essencial do processo de reparo tecidual e que a ingestão de DHA pode afetar a cicatrização de feridas, nossos objetivos são avaliar os efeitos da ingestão de DHA no processo de cicatrização, investigando a via anti-inflamatória colinérgica. Para tanto, administramos óleo rico em DHA para camundongos C57 black/6 durante 4 semanas. Após este período, realizamos as feridas nos animais e avaliamos a celularidade do tecido da ferida; fizemos o acompanhamento do fechamento das mesmas; quantificamos, no tecido, as citocinas IL-1, TNF, sIL-6R, IL-6 e IL-10; as quimiocinas CXCL1/KC e CXCL2/MIP e o fator de crescimento VEGF. Acompanhamos também as feridas realizadas nos camundongos knockdown do transportador vesicular de acetilcolina (VAChT). E, estimulamos os animais com agonista da via anti-inflamatória colinérgica (PNU282978) e nicotina. Verificamos aumento de macrófagos CD45+F4/80+CD206+ e atraso no fechamento das feridas do grupo DHA em relação ao controle. Assim como, no grupo VAChTKD em relação ao controle (WT). Além disso, o grupo DHA apresentou aumento significativo de TNF-'alfa' em 3 e 7 dias após a realização da ferida. O óleo rico em DHA reduziu as concentrações de IL-10 e VEGF no tecido cicatricial na presença do PNU282987 e reduziu a fosforilação de STAT3 após estimulação nicotínica. Porém, não houve diferenças na expressão do receptor 'alfa'-7 nicotínico e na STAT3 total. DHA não alterou a atividade enzimática da acetilcolinesterase. Considerando tais resultados, podemos concluir que o DHA através de seus efeitos anti-inflamatórios, atenua a fase inflamatória da cicatrização e retarda o fechamento da ferida. Os resultados sugerem haver influência da via anti-inflamatória colinérgica na cicatrização e que, o DHA parece influenciar negativamente essa via de sinalizaçãoAbstract: Healing is an essential physiological event for the maintenance of life. Its initial, inflammatory phase is of paramount importance and can be modulated by several mechanisms, such as the action of omega-3 polyunsaturated fatty acids. At present, other central nervous system (CNS) has also been interaggregated with the immune system Modulate the inflammatory response. This communication acts through the vagus nerve, which releases acetylcholine that will act via the nicotinic 'alpha'-7 receptor in cells such as macrophages. Considering that the inflammatory response is an essential part of the tissue repair process and that DHA ingestion can affect wound healing, our objectives are to evaluate the effects of DHA in the healing process by investigating the anti-inflammatory route Cholinergic. To do so, we administered DHA rich oil to C57 black / 6 mice for 4 weeks. After this period, we performed the wounds on the animals and evaluated the cellularity of the wound tissue; We followed the closing of the same ones; We quantified IL-1, TNF, sIL-6R, IL-6 and IL-10 cytokines in the tissue; The CXCL1 / KC and CXCL2 / MIP chemokines and the VEGF growth factor. We also followed the wounds performed on the acetylcholine vesicular transporter (VAChT) knockdown mice. And, we stimulated the animals with agonist of the cholinergic anti-inflammatory route (PNU282978) and nicotine. We observed increased CD45 + F4 / 80 + CD206 + macrophages and delayed closure of the DHA group wounds in relation to the control. As in the VAChTKD group in relation to the control (WT). In addition, the DHA group showed a significant increase of TNF-'alpha' at 3 and 7 days after the wound. DHA-rich oil reduced IL-10 and VEGF concentrations in the scar tissue in the presence of PNU282987 and reduced the phosphorylation of STAT3 after nicotinic stimulation. However, there were no differences in nicotinic 'alpha'-7 receptor expression and total STAT3. DHA did not alter the enzymatic activity of acetylcholinesterase. Considering these results, we can conclude that DHA through its anti-inflammatory effects attenuates the inflammatory phase of healing and delays wound closure. The results suggest that there is influence of the cholinergic anti-inflammatory pathway on healing and that DHA seems to negatively influence this signaling pathwayMestradoNutriçãoMestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolism