Analysis of immunoexpression and PTEN allelic loss in dysplastic lesions and oral squamous cell carcinomas

Orientadores: Helder Antonio Rebêlo Pontes, Felipe Paiva FonsecaDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: O Carcinoma epidermoide é a neoplasia maligna mais comum de boca, representando mais de 95% dos casos diagnosticados neste sítio anatômico. Muitos casos de carcinomas epidermoides de boca (CEB) podem ser precedidos ou estão associados a lesões potencialmente malignas, especialmente as leucoplasias. O processo de carcinogênese envolve a aquisição progressiva de alterações irreversíveis de vários genes, com ativação de oncogenes e inativação de genes supressores tumorais e de genes envolvidos no reparo do DNA. A fosfatase homóloga à tensina deletada no cromossomo 10 (PTEN) é um gene supressor tumoral que exerce um importante mecanismo no controle da aquisição do fenótipo maligno ao inibir a expressão da proteína pAkt, sendo importante no controle da via de sinalização intracelular PI3K?AKT, responsável pelo controle da proliferação celular e apoptose. A perda ou inativação de PTEN ativa a via de sinalização PI3K/AKT, encontrada em diversos tipos de tumores. O objetivo deste estudo foi analisar a perda alélica do gene PTEN e avaliar a imunoexpressão da proteína nas lesões displásicas bucais e CEB. As amostras foram coletadas de 153 pacientes (20 casos controle ¿ C, 30 leucoplasias com displasia leve ¿ DL, 30 leucoplasias com displasia moderada a severa ¿ DMS, e 73 amostras de CEB), provenientes do Serviço de Patologia Bucal do Hospital Universitário João de Barros Barreto (HUJBB). A expressão da proteína PTEN foi investigada através da técnica imuno-histoquímica e a perda alélica foi analisada pelo método de hibridização in situ por fluorescência (FISH). Diferenças entre os grupos foram avaliadas usando o teste Qui-quadrado. Os resultados mostraram que houve um aumento na expressão de PTEN, assim como uma maior perda alélica de acordo com a progressão para a malignidade, onde a expressão foi mais alta em DMS (p=0.002) e CEB (p=0.0259) comparados com o grupo C, além disso, foi observada uma maior expressão em DMS (p=0.0035) e CEB (p=0.049) do que em DL; em relação à análise de FISH, uma maior perda hemizigótica (cópia única) foi observada em CEB comparado com C (p=0.0467) e DL (p=0.0175), assim como uma maior deleção homozigótica em CEB comparado com C (p=0.0159) e DL (p=0.0145). Em conclusão, os resultados deste trabalho sugerem que a perda alélica de PTEN é um importante mecanismo nos estágios finais da aquisição do fenótipo maligno, onde a perda alélica foi observada em 34.25% das amostras de CEBAbstract: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the most common malignant neoplasm in the oral cavity, accounting for more than 95% of the cases diagnosed in this anatomical site. Many cases of OSCC may be preceded by or associated with potentially malignant disorders, such as leukoplakias. The carcinogenesis process involves a progressive evaluation of irreversible changes of several genes, with activation of oncogenes and inactivation of tumour suppressor genes and genes involved in DNA repair. Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10 (PTEN) is a tumour suppressor gene that represents an important mechanism for the acquisition of a malignant phenotype by inhibiting the expression of the pAKT protein, which is important in the control of the intracellular signalling pathway PI3K/AKT, which is responsible for the control of cell proliferation and apoptosis. The loss or inactivation of PTEN activates the PI3K/AKT signalling pathway that is found in several types of tumours. The objective of this study was to analyse allelic loss of the PTEN gene and its protein immunoexpression in dysplastic oral lesions and OSCC. The samples were collected from 153 patients (20 ranulas used as a control ¿ C, 30 leukoplakias with mild dysplasia ¿ MD, 30 leukoplakias with moderate to severe dysplasia ¿ MSD, and 73 OSCC) from the Department of Oral Pathology, João de Barros Barreto University Hospital (HUJBB). PTEN protein expression was investigated using immunohistochemistry, and allelic loss was analysed by fluorescence in situ hybridisation (FISH). Differences among groups were evaluated using the Chi-square test. The results showed that there was an increase in PTEN expression, as well as a greater allelic loss, according to progression to malignancy, where expression was higher in MSD (p=0.002) and OSCC (p=0.0259) compared with the C group, additionally, a higher expression was observed in MSD (p=0.0035) and OSCC (p=0.049) than MD; regarding FISH analysis, a higher hemizygous (single copy) loss was observed in OSCC than C (p=0.0467) and MD (p=0.0175), as well as a higher homozygous deletion in OSCC than C (p=0.0159) and MD (p=0.0145). In conclusion, the results of this work suggest that PTEN allelic loss is an important mechanism in the late stage of the development of oral potentially malignant lesions into oral cancer, where allelic loss was observed in 34.25% of OSCC samplesMestradoEstomatologiaMestra em Estomatopatologia33003033009P4CAPE