Molecular study of patients with auditory neuropathy

Orientador: Edi Lúcia SartoratoDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: A perda auditiva é dos distúrbios sensoriais humanos mais comum, afetando o desenvolvimento infantil, a integração social e a qualidade de vida dos pacientes. A neuropatia auditiva é um tipo de perda auditiva neurossensorial que consiste na alteração na condução do estímulo auditivo por acometimento das células ciliadas internas, do nervo auditivo ou das sinapses entre eles. É caracterizada pela ausência ou alteração das ondas no exame de potenciais evocados auditivos de tronco encefálico, com presença de emissões otoacústicas e/ou microfonismo coclear. Foram mapeados 4 loci relacionados à neuropatia auditiva não-sindrômica: DFNB9 (gene OTOF) e DFNB59 (gene PJVK), associados ao padrão de herança autossômico recessivo; AUNA1 (DIAPH3), autossômico dominante; e AUNX1, ligado ao cromossomo X. Além disso, mutações no gene da conexina 26 (GJB2) também já foram relacionadas à doença. Mutações no gene OTOF desempenham papel significativo, sendo que até o momento já foram identificadas mais de 100 mutações patogênicas em indivíduos com surdez não-sindrômica, em populações de origens variadas, com destaque para a mutação p.Q829X que foi encontrada em cerca de 3% dos casos de surdez na população espanhola. A identificação de alterações genéticas responsáveis pela neuropatia auditiva é um dos desafios que contribui para a compreensão das bases moleculares dos diferentes fenótipos da perda auditiva. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi pesquisar alterações moleculares em pacientes com diagnóstico clínico de neuropatia auditiva em uma amostra de pacientes brasileiros. Foram pesquisadas alterações genéticas em 15 pacientes, entretanto, a mutação p.Q829X no gene da otoferlina não foi identificada em nenhum dos casos. A mutação c.35delG no gene GJB2 foi encontrada em homozigose em três casos e em dois casos em heterozigose e a alteração IVS1+1g>a foi encontrada em heterozigose. Não se pode afirmar, se essas alterações no gene da conexina 26 estariam realmente associadas com a neuropatia auditiva nesses casos, ou se as emissões otoacústicas observadas nesses pacientes representam apenas atividade residual de células ciliadas externas que permaneceram vivas. No entanto, acredita-se que algumas mutações no gene GJB2 podem causar alterações nas células ciliadas internas e terminações nervosas das células ciliadas. Adicionalmente, foram rastreadas mutações no gene OTOF através do sequenciamento completo dos 48 éxons e da região 3¿ UTR. Foram encontradas alterações patogênicas através da técnica OTO-CGH array, sendo elas p.I1573T, p.W718X e p.D1709Efs*54. Apesar de existirem estudos moleculares relacionados à neuropatia auditiva em diferentes populações, é necessária uma maior investigação para estabelecer o envolvimento de alterações genéticas com a etiologia da neuropatia auditiva em indivíduos brasileiros. No gene PJVK foram encontradas alterações silenciosas e nenhuma alteração patogênica foi encontrada nesse gene, esse resultado está de acordo com os achados da literaturaAbstract: Hearing loss is one of the most common human sensory disorders, affecting child development, social integration and quality of life of patients. Auditory neuropathy is a type of sensorineural hearing loss that consists of alteration in the conduction of the auditory stimulus due to involvement of the inner hair cells, the auditory nerve or the synapses between them. It is characterized by the absence or alteration of the waves in the auditory brainstem auditory evoked potentials, with presence of otoacoustic emissions and / or cochlear microphonism. Four loci related to non-syndromic auditory neuropathy were mapped: DFNB9 (OTOF gene) and DFNB59 (PJVK gene), associated with the autosomal recessive inheritance pattern; AUNA1 (DIAPH3), autosomal dominant; And AUNX1, bound to the X chromosome. In addition, mutations in the connexin 26 (GJB2) gene have also been related to the disease. Mutations in the OTOF gene play a significant role, and up to now more than 100 pathogenic mutations have been identified in individuals with non-syndromic deafness in populations of different origins, especially the mutation p.Q829X that was found in about 3 % Of deafness cases in the Spanish population. The identification of genetic alterations responsible for auditory neuropathy is one of the challenges that contributes to the understanding of the molecular basis of the different phenotypes of hearing loss. Thus, the objective of the present study was to investigate molecular alterations in patients with clinical diagnosis of auditory neuropathy in a sample of Brazilian patients. Genetic alterations were investigated in 15 patients; however, the mutation p.Q829X in the otoferlin gene was not identified in any of the cases. The c.35delG mutation in the GJB2 gene was found in homozygous in three cases and in two cases in heterozygosis and the IVS1 + 1g> a alteration was found in heterozygosity. It cannot be stated whether these changes in the connexin 26 gene would actually be associated with auditory neuropathy in these cases, or whether the otoacoustic emissions observed in these patients represent only residual activity of outer hair cells that remained alive. However, it is believed that some mutations in the GJB2 gene can cause changes in the inner hair cells and nerve endings of the hair cells. In addition, mutations in the OTOF gene were screened by complete sequencing of the 48 exons and the 3 'UTR region. Pathogenic alterations were found through the OTO-CGH array technique, being p.I1573T, p.W718X and p.D1709Efs * 54. Although there are molecular studies related to auditory neuropathy in different populations, more research is needed to establish the involvement of genetic alterations with the etiology of auditory neuropathy in Brazilian individuals. In the PJVK gene, silent alterations were found and no pathogenic alteration was found in this gene, this result is in agreement with the literature findingsMestradoGenetica MedicaMestra em Ciências Médicas01-P-3368/2017CAPE