Identification of cancer-associated stem cells in the cell lines SCC-9 ZsGreen and SCC-9 ZsGreen LN-1

Orientador: Edgard GranerDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Células-tronco associadas ao câncer (CTCs) são subpopulações celulares fenotipicamente diversas caracterizadas pela capacidade de proliferar indefinidamente e de formar tumores em modelos animais. A literatura recente sugere que a erradicação destas células parece ser necessária para que neoplasias malignas possam ser controladas. Diversos estudos têm sido realizados para identificar CTCs em neoplasias malignas de diferentes órgãos, inclusive no carcinoma de células escamosas (CCE) da cavidade bucal, a partir de marcadores de superfície como CD44, CD133, CD24, CD326, individualmente ou, mais comumente, em associação com CD44. A expressão dos marcadores de superfície celular para CTCs na linhagem SCC-9 não foi tão amplamente descrita na literatura. Pesquisas anteriores de nosso grupo permitiram estabelecer, a partir da seleção in vivo de células SCC-9 ZsGreen, uma nova linhagem altamente metastática de CCE da cavidade bucal humano denominada SCC-9 ZsGreen LN-1. Portanto, o objetivo do presente estudo é identificar e comparar a presença de CTCs nas linhagens celulares SCC-9 ZsGreen e SCC-9 ZsGreen LN-1. No presente estudo, as CTCs nas linhagens SCC-9 ZsGreen e SCC-9 ZsGreen LN-1 foram identificadas por citometria de fluxo utilizando-se marcação tripla para os seguintes marcadores de superfície: CD44 "standard" (CD44s, e suas isoformas, CD44v3 e CD44v6), CD133, CD326, CD24 e CD271. Os resultados obtidos em ambas as linhagens celulares revelaram elevada positividade para CD44s, CD44v6, CD133, CD326 e CD271 e baixa expressão de CD44v3 e de CD24. Foram observados os seguintes fenótipos: CD44s+/CD326-, CD44s-/CD133+, CD44s-/CD44v6+ y CD44s-/CD271+, o primeiro fenótipo foi observado somente na linhagem SCC-9Zs Green y os três últimos fenótipos foram encontrados nas duas linhagens celulares com uma presença ligeiramente maior na linhagem SCC-9Zs Green LN-1.-. Estes resultados sugerem que as duas linhagens estudadas possuem subpopulações de CTCs. A caracterização detalhada destas células aliada a ensaios adicionais in vitro e in vivo, como capacidade de crescimento em esferóides, tumorigenicidade em modelo animal e análise do comportamento frente a diferentes agentes quimioterápicos será de grande importância para o melhor entendimento do processo metastático e resistência a terapias em CCE da cavidade bucalAbstract: Cancer stem cells (CSCs) are a phenotypically distinct cell subpopulation, characterized by the ability to proliferate indefinitely being tumorigenic in animal models. The recent literature suggests that eradication of these cells seems to be important for the tumors control. Several studies have been performed in order to identify and isolate CSCs in malignant neoplasms of different organs, including oral squamous cell carcinoma (OSCC). Using surface markers such as CD44, CD133, CD24, CD326, individually or in combination with CD44. The expression of cell surface markers for CSCs in SCC-9 cell line is not well described. Previous studies from our group established a highly tumorigenic cell line of human oral SCC, the SCC-9 ZsGreen LN-1 by the in vivo selection from SCC-9 ZsGreen cells. Therefore, the aim of this study is to identify the presence of CSCs through cell surface markers in SCC-9 and SCC-9 ZsGreen ZsGreen LN-1 cell lines. CSCs in SCC-9 ZsGreen and SCC-9 ZsGreen LN-1 cell lines were identified by flow cytometry using triple staining to the following surface markers: CD44 Standard (CD44s, and their isoforms, CD44v3 and CD44v6), CD133, CD326, CD24 and CD271. Both cell lines showed high positivity for CD44s, CD44v6, CD133, CD326 and CD271 and no expression of CD44v3 and CD24. The following phenotypes were observed: CD44s+/CD326-, CD44s-/CD133+, CD44s-/CD44v6+ and CD44s-/CD271+, the first phenotype was observed exclusively in the cell line SCC-9Zs Green and the last ones were found in both cell lines with a slightly higher presence in the metastasic cell line.. Our results suggest that both, SCC-9 ZsGreen and SCC-9 ZsGreen LN-1 showed subpopulations of CSCs. The characterization of these cells and additional in vitro and in vivo assays, as the ability to growth spheroids, tumorigenicity in animal models and the response of these cells under different chemotherapeutic agents could corroborate to the better understanding of the metastatic process and therapeutic resistance on OSCCMestradoPatologiaMestra em Estomatopatologi