Antimicrobial activity of essential oils from different accessions of Mentha spp. against Candida albicans and Candida dubliniensis

Orientadores: José Francisco Hofling, Marta Cristina Teixeira DuarteTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de OdontologiaResumo: O objetivo desse estudo foi avaliar a ação antimicrobiana de óleos essenciais e frações de diferentes acessos de Mentha spp. contra Candida spp., identificando seus compostos e verificando sua citotoxicidade. Os 64 óleos essenciais de diferentes acessos de Mentha spp. foram extraidos utilizando as partes aéreas da planta fresca, por hidrodestilaçãoo em sistema tipo Clevenger. Os óleos foram testados contra isolados clínicos e de referência de Candida albicans (CBS 562) e Candida dubliniensis (CBS 7987). A CIM foi determinada por meio do método de microdiluição (CLSI, 2002). Os melhores acessos testados em células planctônicas foram fracionados em 5 partes em cromatografia de coluna seca e testados posteriormente contra biofilme de C. albicans (SC 5314). Com o inoculo padronizado em meio RPMI-1640, os biofilmes foram produzidos em placas esterilizadas de polietileno de 96 pocos, para testes dos óleos e frações em biofilme maduro e biofilme em formação, sendo quantificados com solução de XTT e analisados através de microscopia óptica e confocal a laser. Os compostos dos melhores óleos e frações foram identificados por cromatografia em camada delgada e cromatografia a gas com detector de massas. A citotoxicidade também foi provada em painel de diferentes linhagens celulares células epiteliais, por meio da avaliação da atividade antiproliferativa, in vitro, utilizando-se o ensaio de sulforrodamina B para avaliação do crescimento celular. O melhor rendimento em óleo essencial (base seca) foi observado para o acesso de M. rotundifolia CM 31 (1,5 %). Quatro óleos se destacaram, apresentando forte atividade com amplo espectro, sendo M. canadensis (CM 05) - (<0,007 a 0,500 mg/mL); M. spicata (CM 30) (0,062 mg/mL a 0,500 mg/mL); M. arvensis CM 36 (<0,007 mg/mL a 1 mg/mL) e M. suaveolens x spicata (CM 52) - (0,062 mg/mL a 0,500 mg/mL). As frações F2 e F3 de M. suaveolens x spicata CM 52 demonstraram a melhor atividade dentre os óleos e frações testadas, apresentando 49 % e 38 % de inibição na concentração de 0,5 mg/mL para biofilme maduro e 70 % de inibição (a 0,062 mg/mL) e 61 % de inibição (a 0,125 mg/mL), respectivamente, para inibição de biofilme em formação. Esses resultados foram confirmados pelas analises microscópicas. Os compostos majoritários do óleo de M. canadensis CM 05 foram carvona (74,84 %) e linalol (4,84 %);de M. spicata CM 30 oxido de piperitenona (28,05 %), beta-E-farneseno (18,58 %) e gama-muuroleno (17,38 %); M. arvensis CM 36 Linalol (33,24 %), acetato de linalol (21,97 %) e alfaterpineol (11,77 %); de M. suaveolens x spicata CM 52 pulegona (52,20 %), piperitenona (29,51 %) e gama-muuroleno (4,44 %). Os óleos essenciais de Mentha spp. apresentam atividade antimicrobiana contra células planctônicas de Candida spp. (de moderada a fraca), exceto os óleos originados dos acessos de M. canadensis CM 05, M. spicata CM 30, M. arvensis CM 36 e M. suaveolens x spicata CM 52. As fracoes F2 e F3 de Mentha suaveolens x spicata CM 52 demonstram efeito antimicrobiano inibitório sobre biofilme em formação e sobre biofilme maduro, alem de ausência de citotoxicidade para células testadasAbstract: The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of essential oils and fractions of different accessions of Mentha spp. against Candida spp., identifying compounds and verifying its cytotoxicity.The essential oils of 64 different accessions of Mentha spp. were extracted using the fresh aerial parts of the plant by hydrodistillation cleavenger type system Then, The the oils were tested against clinical isolates and reference strains Candida albicans (CBS 562) and Candida dubliniensis (CBS 7987). The minimal inhibitory concentration (MIC) was determined by microdilution method, using the CLSI protocol. The best accessions tested on planktonic cells were separated into 5 parts by dry column, and oils and fractions were subsequently tested against biofilms of C. albicans (SC 5314). With standardized inoculum in RPMI-1640, the biofilms were produced in sterile polyethylene plates with 96 wells, for to evaluate the oils and fractions in preformed biofilm and inhibition biofilm formation. After the biofilm was quantified with XTT solution and analyzed by optical and confocal microscopy. The compounds were further identified by thin layer chromatography (TLC) and gas chromatography mass spectrometry (GC-MS). The cytotoxicity was also tested in epithelial cells as well as antitumor activity, by evaluating the antiproliferative activity in different cell lines using the test sulforrodamina B (SBR) for evaluation of cell growth.The best yield in essential oil (dry basis) was observed for the accessions M. rotundifolia CM 31 (1.5% dry basis). Among the 64 oils, four stood out, showed strong activity with broad spectrum, inhibiting all strains tested, and these, M. canadensis (CM 05) - (<0.007 to 0.187 mg/mLto 0.500 mg/ml), M. spicata (CM 30) - (0.062 mg/mL to 0.500 mg/ml), M. arvensis CM 36 (