Influence of the N-acetylcysteine in the muscular degenaration process in dystrophic mice

Orientador: Elaine MinatelDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Estudos recentes demonstram o envolvimento do estresse oxidativo nas distrofinopatias. Neste trabalho, verificamos se o uso do antioxidante N-acetilcisteína (NAC) no período que antecede a mionecrose diminui a degeneração muscular em camundongos mdx, modelo experimental da distrofia muscular de Duchenne. Quinze camundongos mdx com 14 dias de vida receberam por via intraperitoneal 150mg/kg de NAC diluído em salina por 14 dias. Quinze camundongos mdx receberam salina pela mesma via e período. Os músculos tibial anterior (TA), esternomastóide (STN) e diafragma (DIA) foram utilizados para quantificar (1) fibras em degeneração muscular (fibras positivas ao azul de Evans), (2) fibras regeneradas (fibras com núcleo central), (3) áreas de Inflamação/Regeneração e Regeneração, (4) conteúdo de fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?) e do 4-hidroxinonenal (4-HNE), através da técnica de immunoblotting. Amostras de sangue foram utilizadas para quantificar o conteúdo da enzima creatina quinase (CK). NAC promoveu diminuição significativa na porcentagem de fibras em degeneração (marcadas pelo azul de Evans) em todos os músculos analisados, redução significativa de fibras com núcleo central no músculo TA e diminuição significativa na área de Inflamação/Regeneração nos músculos STN e DIA (p<0,05; Teste t de Student). Na análise por immunoblotting, observamos diminuição significativa do TNF-? no músculo DIA e do 4-HNE nos músculos STN e DIA dos camundongos mdx tratados com NAC (p<0,05; Teste t de Student). Diminuição significativa dos níveis de CK foi observada nos animais tratados com NAC (p<0,05; Teste t de Student). Em conjunto, estes resultados demonstram que o antioxidante NAC possa ser potencialmente útil para o tratamento farmacológico da distrofia muscularAbstract: Recent studies strongly support the involvement of oxidative stress in dystrophinopathies. In the present study, we verified whether N-acetylcysteine (NAC) treatment before the cycles of muscle degeneration-regeneration decreases muscular degeneration in mdx mice. Mdx mice at 14 days of age received intraperitoneal injection of NAC (150mg/kg diluted with saline) daily, for 14 days. Control mdx mice received saline by the same via and for the same period of time. The tibialis anterior (TA), sternomastoid (STN) and diaphragm (DIA) muscles were used for the quantification of (1) necrotic fibers (labeled with Evans blue dye), (2) regenerated fibers with central nuclei, (3) inflammation/regeneration area, (4) tumor necrosis factor-alpha (TNF-?) and 4-hydroxynonenal (4-HNE) levels (immunoblotting analysis). The blood of these animals was drawn to evaluate serum CK activity by spectrophotometry. NAC-treated muscle showed a significant decrease in the percentage of Evans blue dye-positive fibers (p<0,05; Student's t Test). The number of fibers with central nuclei decreased in the TA muscle (p<0,05; Student's t Test). The area of inflammation-regeneration decreased in the STN and DIA muscles in the NAC treated group. Immunoblots showed a significant decrease in the levels of TNF-? levels in DIA muscle and of 4-HNE levels in STN e DIA muscles in NAC-treated mice (p<0.05; Student's ttest). NAC significantly decreased the blood levels of creatine kinase in NAC-treated mice (p