Morphological differences in human zygotes and embryos cultured in different media

Orientador: Carlos Alberto PettaDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias MedicasResumo: Objetivo: comparar os efeitos de quatro diferentes meios de cultura na morfologia dos zigotos e embriões. Materiais e métodos: estudo retrospectivo conduzido no Centro de Reprodução Humana de Campinas, em que 2.289 embriões de 319 ciclos de ICSI foram avaliados de setembro de 2006 a setembro de 2008. O protocolo longo foi usado para estimulação ovariana em todos os casos. Todos os oócitos foram cultivados em dois meios diferentes. O meio HTF (Irvine Scientific) foi usado como meio-padrão, enquanto que os meios Universal IVF Médium (Medicult), Global (LifeGlobal) e IVF-30 (Vitrolife) foram usados como secundários. A separação dos oócitos em meios diferentes foi realizada alternadamente após ICSI. A presença e a posição de pronúcleos e Nuclear Precusror Bodies (NPBs) foram checadas 18 a 20 horas após ICSI. Baseado na classificação descrita por Gianaroli et al., os zigotos foram identificados como: (A1) pronúcleos justapostos e centralizados com NPBs grandes e alinhados; (A2) pronúcleos justapostos e centralizados com NPBs grandes e dispersos. Os embriões foram avaliados 44 a 46 horas após ICSI, de acordo com o número de blastômeros, porcentagem de fragmentação e multinucleação. Os embriões considerados top apresentaram quatro blastômeros regulares, fragmentação menor que 20% do volume embrionário e blastômeros não multinucleados. Para a análise dos dados foram utilizados Z-test, odds ratio simples e múltiplo através de regressão logística com seu respectivo intervalo de confiança a 95%. Resultados: quando a classificação dos zigotos foi analisada, o meio IVF-30 mostrou maior porcentagem (55,2%) de zigotos A1+A2, em relação ao HTF, Global e Universal IVF Medium (49,1%, 44,7% e 44,2%, respectivamente). A porcentagem de embriões top foi significativamente maior no meio Global (40,4%) comparado com HTF (21,1%), IVF-30 (25,0%) e Universal IVF Medium (11,1%). No segundo dia de desenvolvimento, Medicult produziu mais embriões com três células em relação aos outros meios que produziram mais embriões com quatro células. Conclusão: Houve diferenças significativas entre os quatro meios de cultura sobre a morfologia dos zigotos e a morfologia embrionária. IVF-30 (Vitrolife) resultou em maior número de zigotos com pronúcleos centralizados e nucléolos justapostos e dispersos. Global (LifeGlobal) sustentou maior formação de embriões top no dia 2 e maiores taxas de clivagem em relação aos demais meiosAbstract: Objective: compare the effects of four different culture media on the quality of zygotes and embryos. Methods: This retrospective study, performed at the Center for Human Reproduction of Campinas-Brazil analyzed 2289 embryos were assessed from September 2006 to September 2008. Long protocol was used for ovarian stimulation in all cases. The oocytes of each patient were cultivated in two different culture media. The medium HTF - Irvine was set as the default for all cycles and IVF Medium - Medicult, GGG 20 - Global and IVF 30 - Vitrolife defined as secondary media. The sibling oocytes were divided in the two culture media after ICSI. The confirmation of fertilization and classification as described by Gianaroli were evaluated 18-20 hours after ICSI. On the second day (day 2) of development, the embryos were evaluated according the number of cells, percentage of fragmentation and number of nuclei. On day 2, the embryos that had four cells with less than 20% of fragmentation and were mononucleated embryos were classified as Top. Z-test and Odds ratios were used for statistical analysis. Results: IVF-30 showed a higher percentage (55.2) of zygotes A1 + A2 when compared to HTF, Global and Universal IVF Medium media (49.1%; 44.7%; 44.2% respectively) The percentage of Top embryos was significantly higher in Global medium (40.4%) compared to HTF (21.1%), IVF-30 (25.0%) and Universal IVF medium (11.1%). On day 2 Universal IVF Medium produced more embryos with three blastomeres when compared to other media that produced more embryos with four blastomeres. Conclusions: The use of IVF- 30 medium resulted in a higher number of zygotes with centralized pronuclei with juxtaposed or scattered nucleoli. Meanwhile, Global medium produced a greater number of morphologically good embryos (TOP) and higher cleavage rate on the second day of developmentUniversidade Estadual de CampiTocoginecologiaMestre em Tocoginecologi