Radiographic and microbiological analysis of root canals of dogs' teeth with periapical lesions before and after chemo-mechanical preparation

Orientador: Francisco Jose de Souza FilhoTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Os objetivos deste trabalho foram: investigar microbiologicamente, por método de cultura e pelo método do Checkerboard DNA-DNA hybridization, canais radiculares antes (C1) e após preparo químico-mecânico (C2); e, analisar radiograficamente, lesões periapicais induzidas em dentes de cães, avaliando a possível relação entre comprimento de dente e tamanho de lesão periapical. Foram utilizados 21 pré-molares inferiores de quatro cães. Os dentes foram acessados, as polpas removidas e permaneceram expostos ao meio oral por 120 dias. Após este período, as imagens das reações periapicais induzidas foram avaliadas pelo software Imagelab 2.4, mensurando área e perímetro. O preparo químico-mecânico foi procedido, sendo os dentes divididos em três diferentes grupos, de acordo com a substância química-auxiliar testada: G1- NaCl 0,09%; G2- Clorexidina 2% gel; e G3- NaOCl 5,25% + EDTA 17%. Em cada uma das amostras foi investigada a microbiota por método de Cultura que propicia crescimento de bactérias anaeróbias estritas; e, a presença de até 40 espécies bacterianas foi investigada pela técnica de Checkerboard DNA-DNA hybridization. As médias das áreas das imagens radiográficas das lesões foram de 0,06 cm2, para os segundos pré-molares, 0,12 cm2 para os terceiros pré-molares e 0,18 cm2 para os quartos pré-molares. Houve associação entre os dentes de maior comprimento com as maiores áreas de lesão periapical. Em C1 foram isoladas 60 bactérias cultiváveis, pertencendo a 32 diferentes espécies, variando de 0 a 9 espécies por canal, sendo 70% anaeróbios facultativos e 18% anaeróbios estritos, com predominio de Gram-positivos (73%). Os gêneros bacterianos mais freqüentemente isolados foram: Streptococcus, Staphylococcus, Neisseria, Propionibacterium, Actinomyces e Prevotella. Pelo Checkerboard foram detectadas 158 bactérias, pertencendo a 29 diferentes espécies, variando de 0 a 19 espécies por canal, sendo 67% anaeróbios estritos, com predomínio de Gram-negativos (67%). Os microrganismos mais frequentemente encontrados foram Campylobacter gracilis, Capnocytophaga sputigena, Leptotrichia bucallis, Prevotela intermedia, Streptococcus gordonii e Gemella morbilorum. Em C2 todos os canais apresentaram ausência de crescimento microbiano pela Cultura, porém, pelo Checkerboard foram detectadas 33 bactérias, pertencentes a 9 diferentes gêneros e 11 diferentes espécies, variando de 1 a 8 por canal, em 10 dos 21 dentes analisados. Gemella morbilorum, Capnocytophaga sputigena, Leptotrichia bucallis e Fusobacterium nucleatum sp. Polymorphum (não detectada em C1), foram detectadas com maior freqüência após o preparo químico mecânico. No G1 houve uma redução 89% de células bacterianas. A utilização de clorexidina gel 2% (G2) e do NaOCl 5,25 (G3) permitiram redução de 97% e 99%, respectivamente, não diferindo entre si, ao nível de significância de 5%. Concluíu-se que, a microbiota de canais radiculares de dentes de cães com lesão periapical induzida, por exposição ao meio oral, após 120 dias, apresenta grande número de espécies; que o preparo químico mecânico promoveu uma grande redução de microrganismos; e que os resultados sugerem existência de relação positiva entre comprimento de dente e tamanho de lesão periapicalAbstract: The objectives of this study were: to investigate, by Culture and by Checkerboard DNA-DNA hybridization, microorganisms from infected root canals before (S1) and after chemomechanical preparation (S2), and analyse radiographically induced periapical lesions in dog's teeth, for a possible relation between tooth length and lesion size. Twenty one lower premolars of four mongrel dogs were used. Their chambers were accessed and their pulps removed and left open to the oral environment for the total period of 120 days. The radiographs were evaluated by Imagelab 2.4 software to measure the area and perimeter images of the induced periapical lesions. Chemomechanical preparation was proceded, the teeth were assigned to three groups, according to the substance tested: G1- NaCl 0.09%; G2- chlorhexidine gel 2%; G3-. NaOCl 5.25% + EDTA 17%. Methodology for handling, culture and incubation for growth of strict anaerobe species was used; and, 40 bacterial species were investigated in each one of the samples by Checkerboard DNA-DNA hybridization. Measurements of the radiographic image data of the lesions were 0.06 cm2 for the second premolars, 0.12 cm2 for the third premolars and 0.18 cm2 for the fourth premolars. There was a positive association between tooth length and size of periapical lesion. In S1, a total of 60 cultivable isolates were recovered from 32 different species, ranging from 0 to 9 per canal. Facultative anaerobe species comprised 70% of the samples and 18% were strict anaerobic species with one microbiota predominantly Gram-positive (73%). The most frequent genera recovered from the canals were: Streptococcus, Staphylococcus, Neisseria, Propionibacterium, Actinomyces and Prevotella. One hundred and fifty eight bacteria were detected from 29 different species, ranging from 0 to 19 per canal. Strict anaerobe species comprised 67% of the samples with one microbiota predominantly Gram-negative (67%). The most frequent species detected by Checkerboard from the canals (S1) were: Campylobacter gracilis, Capnocitophaga sputigena, Leptotrichia bucallis, Prevotela intermedia, Streptococcus gordonii e Gemella morbilorum. In S2, no microbial growth was observed by culture. However, by checkerboard, 33 bacteria were detected, from 9 different genera and 11 differet species, ranging from 1 to 8 per canal, in 10 of the 21 investigated teeth. Gemella morbilorum, Capnocytophaga sputigena, Leptotricchia bucallis e Fusobacterium nucleatum sp. Polymorphun (not detected in S1), were detected with higher frequency after chemomechanical preparation. There was 89% of bacteria reduction in G1. Use of chlorhexidine gel 2% (G2) and NaOCl 5.25% (G3) allow bacteria reduction of 97% and 99%, respectively, with no statistical difference, with 5% significance. In conclusion, the root canal microbiota of dog teeth with induced periapical lesion, by exposure to the oral environment, after 120 days presents a great number of different species; results suggest positive relationship between the tooth length and size of the periapical lesion.DoutoradoEndodontiaDoutor em Clínica Odontológic