Caracterização do polimorfismo dos alelos HLA de classe I e nos microssatelites do fator de necrose tumoral em pacientes brasileiros com psoriase vulgar

Orientador: Maria Helena Stangler KraemerDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias MedicasResumo: Introdução- A psoríase é uma doença de pele crônica, inflamatória com genes envolvidos na predisposição à doença, localizados na região altamente polimórfica do complexo principal de histocompatibilidade, no cromossomo 6p21.3. O objetivo desse estudo foi identificar, avaliar a distribuição e determinar as associações genéticas dos genes HLA de classe I e os microssatélites do Fator de Necrose Tumoral (TNF) em pacientes brasileiros com psoríase. Pacientes e Métodos- As tipagens HLA-A, -B, -C foram realizadas em 92 pacientes com psoríase e 160 indivíduos sadios como grupo-controle através do DNA genômico, utilizando-se o método PCR/SSP. Desses 92 pacientes, com psoríase, foram tipados 70 pacientes e 71 indivíduos sadios para os microssatélites do TNF, classificados de acordo com o número de alelos (TNFa, b, c, d, e) e amplificados através do DNA genômico pela reação em cadeia da polimerase, visualizadosem gel desnaturante de poliacrilamida, em condições específicaspara cada loco. Resultados- Dos 92 pacientes, 43,3% foram HLA-Cw*06 positivo (p<0,0001 e OR=5.3). Os alelos HLA-B*13, HLA-B*57, HLA-Cw*12 e os haplótipos HLA-B*13 Cw*06, HLAB* 57 Cw*06 e HLA-B*39 Cw*12 mostraram-se aumentados nos pacientes com psoríase, com significânciaestatística (P<0,05), quando comparados ao grupo-controle de indivíduos sadios. Os microssatélites TNFa4, TNFb1, TNFe1 e o haplótipo TNFa2 b1 c2 d4 e1 mostraram-se com fTeqüência diminuída e com significância estatística (P<0,05) nos pacientes com psoríase quando comparados ao grupo-controle de indivíduos sadios. O alelo HLA-B*13 e os haplótipos HLA-B*13 Cw*06, TNFa11 b4 c1 d3 e3, mostraram-se com freqüências aumentadas e significância estatística (P<0,05) nos pacientes com psoríase tipo TI quando comparados ao grupo-controle de indivíduos sadios. Também foi encontrado na comparação de pacientes psoríase tipo I com o grupo-controle de indivíduos sadios, um haplótipo estendido nessa região cromossômica, HLA-B*57 HLA-Cw*06 TNFa2 b5 c2 d4 c3, com signifiQânciaestatística (P<0,05). Conclusões- Esse estudo mostrou uma associação positiva entre os alelos HLA-B*13, HLA-B*57, Cw*06, Cw*12 e os haplótipos HLA-B*13 Cw*06, HLA-B*57 Cw*06, HLAB* 39 Cw*12, TNFa11 b4 c1 d3 e3 e o haplótipo estendido HLA-B*57 Cw*06 TNFa2 b5 c2 d4 e3, dete~~~o susceptibilidade para o desenvolvimento da psoríase. Também foram encontrados os microssatélites TNFa4, TNFbI, TNFel e o haplótipo TNFa2 bl c2 d4 el com associação negativa, sugerindo um fator de proteção na psoriase. Esses resultados apontam para o fato de que a detecção dos polimorfismos do HLA classe I e microssatélites no loco TNF poderiam ser marcadores de susceptibilidade e proteção genética na doença em pacientes brasileirosAbstract: Introduction - Psoriasis is a genetic chronic inflammatory skin disorder with genes involved in disease predisposition located within the highly polymorphic Major Histocompatibility Complex (MHC) region on the chromosome 6p21.3. The goal of the present study was to identify, evaluate distribution and determine genetic associations of HLA class I genes and Tumor Necrosis Factor (TNF) microsatellites with psoriasis in Brazilian patients. Patients and Methods - HLA-A,-B, -C typingwas carriedout in 92 psoriasispatientsand 160 healthy individuaIs through genomic DNA using the PCR-SSP method. Typing ofTNF microsatellites was carried out in 70 of the 92 psoriasis patients and in 71 healthy controls. TNF microsatellites were classified according to the number of alleles (TNFa, b, c, d, e) amplified through genomic DNA by polymerase chain reaction and visualized in denaturing polyacrylamine gel, in specific conditions for each locus. Results - Of the 92 patients, 43.3% were HLA-Cw*06 positive (p<0.0001 and OR=5.3). HLA-B*13, HLA-B*57, HLA-Cw*12 alleles and HLA-B*13 Cw*06, HLA-B*57 Cw*06 and HLA-B*39 Cw*12 haplotypes were found to be increased in patients with psoriasis, with a statistical significance (p<0.05) when compared to healthy individuaIs. TNFa4, TNFbl, TNFel microsatellites and the TNFa2 bl c2 d4 el haplotype showed a decreased frequency and a statistical significance (p<0.05) in psoriasis patients when compared to healthy individuals. HLA-B*13 allele and HLA-B*13 Cw*06, TNFall b4 c1 d3 e3 haplotypes showed increased frequencies and a statistical significance (p<0.05) in patients with type II psoriasis when compared to healthy individuaIs. We further found an extended haplotype in that chromosomic region, HLA-B*57 HLA-Cw*06 TNFa2 b5 c2 d4 c3, with a statistical significance (p