Analise fibrinolitica de cinco formulações comerciais de estreptoquinase

Orientador : Jose Luiz DonatoDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias MedicasResumo: A estreptoquinase é uma proteína de 47 kDa secretada pelas bactérias Streptococcus do grupo ß-hemolítico. A estreptoquinase ativa o plasminogênio do soro humano formando um complexo capaz de converter moléculas de plasminogênio em plasmina. O nosso objetivo foi avaliar cinco formulações comerciais de estreptoquinase disponíveis no Brasil, comparando as suas capacidades in vitro de induzir a formação do coágulo de euglobulina e de ativar o plasminogênio in vitro. O tempo de lise da euglobulina foi analisado em microplaca na presença de: trombina humana e estreptoquinase. A formação do coágulo foi iniciada com a adição da euglobulina plasmática. A turbidez foi medida a 340 nm durante 30 s. No teste de lise da euglobulina a StreptaseTMapresentou uma maior atividade fibrinolítica, sendo usada como formulação de referência. As formulações UnitinaseTM e SolustrepTM foram as menos ativas, com cerca de 50% da atividade observada na formulação de referência. A ativação do plasminogênio foi analisadausando o substratoS-2251TM específicopara plasmina.Todas as estreptoquinases testadas ativaram o plasminogênio, observando diferenças significantes. StreptaseTM(15,13 kU/L; M ± D.P., n=14) e StreptonaseTM (18,94 ± 0,92 kU/L, n=16) foram as formulações mais ativas, enquanto UnitinaseTM (6,19 ± 0,48 kU/L, n=12) e StrekTM(6,57 ± 0,65 kU/L, n=14) foram as menos ativas. SolustrepTM (10,66 ± 0,54 kU/L, n=15) apresentou uma atividade intermediária. As variações entre as diferentes formulações, em ambos os testes citados acima, apresentaram correlação com os resultados densitométricos após separação das proteínas através da eletroforese em gel de poliacrilamida (SDSPAGE). Nós concluímos que as formulações testadas apresentaram uma variação significativa na atividade in vitro. A relevância clínica destas diferenças ainda precisa ser estabelecidaAbstract: Streptokinase, a 47 kDa protein secreted by most group A, C and G ß-hemolytic streptococci, activates human plasminogen to form an active complex capable of converting other plasminogen molecules to plasmin. The aim of this study by was to evaluate five commercially available streptokinase formulations in Brazil by comparing their activity in euglobulin clot formation and plasminogen activation. The euglobulin Iysis time was evaluated in 96-well microtiter plates. Initially, human thrombin and streptokinase were placed in individual wells and clot formation was initiated by the addition of plasma euglobulin. The increase in turbidity was measured at 340 nm every 30 s. Plasminogen activation was assayed using the plasmin specific substrate S-2251TM.StreptaseTMwas used as the reference formulation and showed the strongest fibrinolytic activity in the euglobulin Iysis test. The formulations UnitinaseTM and SolustrepTM were the least active, with about 50% of the activity of the reference formulation. Ali streptokinases tested activated plasminogen but there were significant differences in their activities. StreptaseTM(15.13 ±1.00 kU/L; mean ± S.E.M., n=14) and StreptonaseTM(18.94 ± 0.92 kU/L,n=16)werethe mostactiveformulationswhile UnitinaseTM(6.19 ± 0.48. kU/L, n=12) and StrekTM(6.57 ± 0.65 kU/L, n=14) were the weakest; SolustrepTM (10.66 ± 0.54 kU/L, n=15) showed intermediate activity. The variations in the activites of the different formulations in the euglobulin Iysis test and in the hydrolysis of the chromogenic substrate were closely correlated with their electrophoretic (SDS-PAGE) profiles. We conclude that the streptokinase formulations examined varied significantly in their activity ín vítro. The clinical implications of these differences remain to be establishedMestradoMestre em Farmacologi