Correlação clinica e imunologica do microquimerismo do sangue periferico e impacto dos fatores imunogeneticos em pacientes brasileiros apos o transplante de figado

Orientador : Maria Helena Stangler KraemerTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias MedicasResumo: Introdução - No transplante de figado, numerosos estudos demonstraram o microquimerismo alogênico. As implicações clínicas e imunológicas permanecem inconclusivas. Por outro lado, a influência das desigualdades HLA e a aloreatividade do doador são, igualmente, conflitantes. Na base desses dados controversos, esse trabalho analisou a presença do microquimerismo alogênico no transplante de figado e investigou, prospetivamente, a cinética dos leucócitos do doador relacionados a episódios de rejeição. Estendeu-se esse estudo para determinar a influência dos fatores imunogenéticos nos pacientes após o transplante de figado. Métodos - Foram analisadas, a presença de microquimerismo alogênico, a influência dos alelos HLA e os anticorpos anti-HLA doador- específico envolvendo 50 pares doador/receptor por três anos e dois meses. As análises foram realizadas no sangue periférico do receptor. O DNA foi extraído das amostras e a tipagem dos alelos HLA-DRBl e -DQBl foi realizada pelas reações em cadeia da polimerase, utilizando-se primers seqüência específica (pCRlSSP) e a análise do microquimerismo por nested PCRlSSP. O teste de Citotoxicidade Dependente de Complemento (CDC) foi utilizado para determinar a reatividade de Anticorpos contra um painel de células T e B (PRA) Resultados - O microquimerismo foi detectado em 72% dos pacientes e o efeito do microquimerismo nos episódios de rejeição foi significante (P=0,002), enquanto o efeito das desigualdades HLA não se mostrou significante com uma ou duas desigualdades (p=O,98). Receptores com HLA-DRBl *01(P=0,002), DRBl *04 (p=0,003 e DQBl *03 (P=0,002) mostraram diminuição das freqüências, quando comparadas com indivíduos controles. Os receptores com o alelo HLA-DQBl *02 (P=0,04) mostraram aumento desse alelo em relação aos controles sadios. E receptores portadores do alelo HLA-DRBl *15011 mostraram um fator de risco altamente significativo (P=0,007) no desenvolvimento do transplante de figado. Finalmente, os efeitos dos anticorpos anti-HLA doador-específico no transplante de figado não foi evidente. Conclusões - Esse estudo indicou que o método nested PCR/SSP foi sensível na detecção do microquimerimo alogênico, sendo esse fenômeno observado na maioria dos pacientes estudados. O microquimerismo alogênico esteve associado, significantemente, a episódios de rejeição nos pacientes após o transplante de figado. A análise das desigualdades HLA demonstrou diminuição de episódios de rejeição em pacientes com maior número de desigualdades HLA-DRBl e -DQBl. O alelo HLA-DRBl *15 foi associado ao fator de risco altamente significante no transplante de figado e o prolongamento do tempo de sobrevida foi maior nos indivíduos do sexo masculino. Entretanto, será necessária uma investigação mais específica no microquimerismo alogênico e nos anticorpos anti-HLA devido ao fato de determinados genes HLA parecerem desempenhar um papel na natureza e severidade das doenças relacionadas ao transplante de figadoAbstract: Background - In liver transplant, a large number of studies has demonstrated allogeneic microclrimerism. Clinical and immunological implications remain inconclusive; on the other hand, influence of HLA mismatch and donor alloreactivity also remain conf1icting. On the basis of these controversial data, the present study analyzed the presence of allogeneic microclrimerism in liver .transplant and prospectively investigated donor leukocyte kinetics related to rejection episodes. This study was extended into determining the influenceof immunogenetic factors in patients afier tiver transplant. Methods - Presence of allogeneic microclrimerism, influence of HLA alleles and donor specific anti-HLA antibodies were analyzed involving 50 donor/recipient pairs during a period of three years and two months. Analyses were carried out in peripheral blood of recipients. DNA was extracted from the samples and typing of HLA-DRBl and -DQBl alleles was obtained by Polymerase Chain Reaction using Sequence-Specific Primer (PCR/SSP). Microclrimerism was identified through nested PCR/SSP. The Complement- Dependent Cell Cytotoxicity (CDC) test was used to determine Panel Reactive Antibodies (PRA) of T and B cells. Results - Microclrimerism was detected in 72% of patients and the effect of microclrimerism on rejection episodes was found to be significant (p=0.002), while the eifect of HLA mismatch did not show to be significant, with one or two mismatches (p=0.98). Recipients with HLA-DRBl *01 (p=0.002), DRBl *04 (p=0.003), and DQBl *03 (p=0.002) alleles showed decreased frequencies when compared to control individuaIs. Recipients with the HLA-DQB1*02 allele (p=0.04) showed an increase of that allele in relation to healthy controls. Further, recipients carrying the HLA-DRBl *15011 allele showed a highly significant risk factor (p=0.007) in relation to development of tiver transplantation. Finally, eifects of donor specific anti-HLA antibodies on tiver transplant were not evident. Conclusion - The present study showed that the nested PCR/SSP method was sensitive in detection of allogeneic microchimerism,and that phenomenon was observed in the majority of examined patients. Allogeneic microclrimerismwas significantly associated to rejection episodes in post tiver transplant patients. Analysis of HLA mismatch demonstrated a decrease in rejection episodes in patients with a larger number ofHLA-DRBl and -DQBl mismatches. The HLA-DRBl *15 allele was associated to a highly significant risk factor in liver transplantation and survival time extension was greater in male patients. However, a more specific investigation of allogeneic microchimerism and anti-HLA antibodies is necessary, due to the fact that certain HLA genes seem to play a role in the nature and severity of diseases related to liver transplantationDoutoradoCiencias BiomedicasDoutor em Ciências Médica