Epidemiologia molecular de Staphylococcus aureus resistentes a oxacilina isoladas de pacientes do Hospital das Clinicas

Orientador : Maria Luiza MorettiTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Infecções hospitalares causadas por Staphylococcus aureus resistentes oxacilina (SARO) representam grave problema médico e hospitalar no mundo todo e têm sido causadoras de surtos e endemias, principalmente nos hospitais de médio e grande porte e nos universitários, com altas taxas de mortalidade. O emprego de técnicas discriminatórias por análise do DNA de cepas envolvidas nas infecções hospitalares é um recurso valioso para o conhecimento do comportamento epidemiológico dos SARO. Nosso estudo analisou a diversidade genômica das cepas de SARO, isoladas de pacientes portadores de infecção hospitalar, internados no Hospital das Clínicas da Universidade Estadual de Campinas, durante o período compreendido entre 1995-2001, comparativamente com os perfis genômicos obtidos no estudo, durante os anos de 1991 até 1993. Foram aplicados dois métodos de tipagem molecular. O perfil do DNA genômico de cepas de SARO no período de 1995 a 2001 por ¿Eletroforese em Gel de Campo Pulsado¿ (PFGE), comparativamente com o perfil de cepas SARO estudadas em 1991 a 1993 pela mesma técnica molecular. Foi realizada a análise de DNA genômico por polimorfismo amplificado aleatoriamente, ¿Restriction Amplification Polymorphic DNA¿ (RAPD), nas cepas SARO de 1995 a 2001. Foram estudadas 117 cepas de SARO obtidas de pacientes internados entre 1995 a 2001. Utilizando-se a técnica de PFGE, foi observado que 80 (68,4%) cepas pertenciam ao mesmo perfil genômico A, 18 (15,4%) pertenciam a um perfil genômico muito relacionado AM, 18 (15,4%) pertenciam a um perfil genômico possivelmente relacionado AP e 1 (0,8%) cepa pertenciam a um perfil genômico não relacionado. No período de 1991 a 1993, as 73 cepas de SARO estudadas foram representadas por cinco diferentes perfis: A, B, C, D e E. O perfil A foi o mais freqüente e foi identificado em 55 (75,3%) cepas; três cepas muito relacionadas e 4 possivelmente relacionadas também foram identificadas. Os perfis genômicos A, AM e AP encontrados no período de 1995-2001, foram idênticos àqueles obtidos entre 1991 a 1993, demonstrando a presença, a disseminação clonal e a persistência de uma cepa endêmica dentro do ambiente hospitalar num período de 10 anos. A análise dos padrões mostrou um coeficiente de similaridade de 96% entre os perfis A no período de 1991-1993 e 1995-2001. Através da técnica de RAPD foram identificados dois diferentes padrões de agrupamento: o padrão a foi representado por 43 cepas e o número de bandas variou de 8 a 10, enquanto que o agrupamento b foi representado por 74 cepas e o número de bandas variou de 5 a 7. O coeficiente de similaridade entre os padrões a e b obtido através desta técnica foi de 86%. A aplicação de métodos de biologia molecular permitiu uma melhor compreensão do comportamento epidemiológico de SARO no Hospital de Clínicas da Unicamp. A persistência do mesmo perfil genômico durante um período de 10 anos revela alta probabilidade de transmissão cruzada deste patógenoAbstract: Nosocomial infections caused by MRSA represent a serious medical and nosocomial problem around the world and have been the cause of epidemics and outbreaks with a high mortality rate mainly in University Hospitals and large and medium sized hospitals. The use of discriminatory techniques through DNA analysis of strains involved in nosocomial infections is an extremely valuable resource to confirm the efficacy of control measures related to the causing agents of nosocomial infections. This study has analyzed the genomical diversity of MRSA strains isolated from nosocomial infection carriers hospitalized at the Hospital das Clínicas da Universidade Estadual de Campinas, from 1995 to 2001, comparing them with the genomical profiles obtained from 1991 to February 1993. Two molecular typing methods were applied: - RAPD-PCR genomical DNA analysis in two periods of time and the DNA profile by PFGE. 117 MRSA strains were studied-obtained from carriers hospitalized from 1995 to 2001. Through PFGE, it has been observed that 80 (68.4%) strains had the same genomic profile A, 18 (15.4%) strains had a closely-related genomic profile AM, 18 (15.4%) strains had a possibly-related genomic profile AP and only 1 (0,8%) strain presented an unrelated profile. In the period from 1991 to 1993, 73 strains presented five distinctive DNA profiles: A, B, C, D and E. Profile A was the most frequent DNA pattern and was identified 55 (75.3%) strains; three closely-related and four possibly related profiles were also identified. The genomic profiles A, AM and AP identified in the period from 1995-2001 were identical to those obtained from 1991 to 1993, demonstrating the presence, the clonal dissemination and the persistence of an endemic strain in a nosocomial environment within a ten-year period. The computer analysis of the endemic profile A identified in period 1991-1993 and profile A from period 1995-2001 showed a 96% of similarity and they were considered to be the same profile A and they came from the common MRSA clone widely recognized in Sao Paulo and other Brazilians hospitals. Two different cluster patterns have been identified through RAPD; the profie a was represented by 43 (36.7%) strains and there was a variation from 8 to 10 fragments while profile b was represented by 74 (53.3%) strains and there was a variation from 5 to 7 fragments. Cluster analysis showed an 86% coefficient of similarity. A better understanding of the epidemiological behavior of MRSA strains at Hospital de Clínicas da Unicamp has been achieved with the application of molecular biology methods. The persistence of the same genomic profile within a ten-year period has shown a high probability of a crossed transmission of such pathogenDoutoradoMicrobiologi