Estabelecimento de um modelo experimental murino para a infecção pelo Helicobacter pylori : aspectos histopatologicos

Orientador: Jose Murilo Robilotta ZeituneDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: O H. pylori é uma bactéria espiralada, gram-negativa e microaerofílica que coloniza a mucosa gástrica humana. A infecção crônica causada pelo organismo é associada ao desenvolvimento de gastrite, úlcera péptica e câncer gástrico. Considerando que os mecanismos patogênicos da infecção não estão totalmente esclarecidos e os estudos utilizando modelos experimentais para o estudo da infecção são escassos no Brasil, o objetivo do presente estudo foi estabelecer um modelo experimental murino para a infecção pelo H. pylori, utilizando uma cepa patogênica da bactéria. Foram utilizados 126 camundongos BALB/c machos, com 6 a 8 semanas de idade, divididos em três grupos: GA: onde 42 animais foram inoculados com l ml de suspensão preparada com bactérias frescas contendo IO8 UFC/ml; GB: onde 42 animais foram inoculados com l ml de suspensão preparada com bactérias congeladas contendo IO8 UFC/ml e GC: onde 42 animais foram inoculados com 1 ml de caldo brucella, constituindo o grupo controle. Os animais foram inoculados por via oral durante dois dias consecutivos. Lotes de 6 a 7 animais de cada grupo foram sacrificados aos 7, 14, 21, 28, 35 e 60 dias pi e fragmentos do estômago e duodeno foram coletados. Metade dos fragmentos foi submetida à cultura. Os fragmentos restantes foram submetidos aos procedimentos rotineiros para inclusão em parafina, microtomia e colorações H&E e Giemsa modificado. Os resultados obtidos demonstraram que, embora o H. pylori não tenha sido isolado do trato gastrintestinal murino, os animais inoculados exibiram duodenite e infiltrado inflamatório no estômago. A presença da bactéria foi confirmada nos fragmentos corados pelo Giemsa na maioria dos animais infectados; o número de organismos diminuiu durante a infecção. No duodeno, independentemente da condição da cepa utilizada, a infiltração exibiu-se discreta a moderada nas vilosidades e mucosa. Nos animais do grupo GA, o infiltrado foi linfoplasmocitário até o 35° dia pi; entretanto, no grupo GB, o infiltrado demonstrou-se linfomonocitário durante os 60 dias pi. No estômago, o H. pylori induziu o desenvolvimento de infiltrado linfomonocitário no antro e corpo dos animais infectados. Embora não foram observadas diferenças quanto à intensidade e a natureza do infiltrado nos grupos GA e GB, verificou-se que a cepa fresca foi capaz de induzir a inflamação gástrica desde os períodos iniciais da infecção. No grupo GA, observou-se ainda que o infiltrado inflamatório foi mais persistente, permeando o estômago durante os 60 dias pi. Tanto no estômago quanto no duodeno, o pico da infecção foi visualizado aos 21 dias pi. Os dados observados no grupo GB sugeriram ainda que o processo de congelamento provavelmente inibiu a expressão de antígenos bacterianos, suprimindo a resposta plasmocitária observada no duodeno dos animais do grupo GA. Embora o congelamento não tenha interferido na natureza da infiltração gástrica, constatou-se a alteração no potencial patogênico da cepa e, consequentemente, no estabelecimento e manutenção da infecção. Em conjunto, os dados aqui descritos demonstraram que o camundongo BALB/c, apesar de ter desenvolvido duodenite e infiltrado inflamatório no estômago, demonstrou-se uma linhagem pouco suscetível à gastrite e ulcerogènese induzidas pela inoculação experimental do H. pyloríAbstract: Helicobacter pylori is a gram-negative, spiral shaped and microaerophilic bacterium that colonizes human gastric mucosa. Chronic infection caused by H. pylori is associated with gastritis, peptic ulcer and gastric cancer. Considering that pathogenic mechanisms of infection has not been fully clarified and studies employing experimental H. pylori infection are scarce in Brazil, the aim of present study was to establish an experimental murine model for H. pylori infection. One hundred twenty-six male BALB/c mice, 6-8 weeks old. were divided in three groups: G A: 42 animals were challenged with l ml of suspension prepared with fresh clinical isolate adjusted to 108 CFU/ml; GB: 42 animals were challenged with 1 ml of suspension prepared with frozen bacteria adjusted to 108 CFU/ml and GC: 42 animals were inoculated with 1ml of brucella broth; they composed the control group. Mice were challenged by the oral route for two consecutive days. Six to seven animals from each group were killed at 7, 14, 21, 28, 35 and 60 days pi and fragments of stomach and duodenum were collected. One half of fragments was destinated to culture. The other half was paraffin imbibed and stained by Hematoxylin- Eosin (HE) and Giemsa. The results showed that, although H. pylori has not been isolated from gastrointestinal murine tract, challenged mice exhibited duodenitis and inflammatory infiltration in the stomach. The presence of bacteria was confirmed by Giemsa in the majority of infected animals and the number of organisms decreased during infection. At duodenum, the infiltration was mild to moderate in the villi and mucosa in the groups GA and GB. In group GA, the infiltration was lymphoplasmacytic until 35th day; however, in the group GB, the infiltration was h/mphomonocytic during 60 days pi. In the stomach, H. pylori induced h/mphomonocytic infiltration in the antrum and corpus of infected animals. Although there were not differences in relation to intensity and nature of infiltration in the groups GA and GB, the fresh clinical isolate was able to induce gastric inflammation since initials periods of infection. In the group GA the inflammatory infiltrate was persistent, permeating stomach during 60 days. In the stomach and duodenum, the peak of infection was visualized at 21 day. Data observed in the group GB suggest that freezing probably inhibited expression of bacterial antigens, suppressing the plasmacytic response observed at duodenum of mice in group GA. Although freezing did not interfere in the nature of gastric infiltration, it had altered pathogenic properties of H. pylori strain, and consequently, the establishment and maintenance of infection. In conclusion, data described here demonstrated that, in spite of mice ad developed duodenitis and gastric inflammatory infiltration, BALB/c mouse is not susceptible to development of gastritis and peptic ulcer during H. pylori experimental infectionMestradoCiencias BasicasMestre em Clinica Medic