Estudo molecular da hiperplasia adrenal congenita por deficiencia da enzima 21-hidroxilase correlação genotipo-fenotipo

Orientadores: Margaret de Castro, Maricilda Palandi MelloDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: A hiperplasia adrenal congênita (HAC) constitui um grupo de doenças hereditárias decorrentes da deficiência de uma das enzimas necessárias para a esteroidogênese adrenal. A forma mais comum de HAC é decorrente da deficiência da 21-hidroxilase (21-OH), correspondendo a 90-95% de todos os casos, cuja herança é autossômica recessiva. Mutações no gene CYP21 são responsáveis pelas diferentes formas da doença. O gene CYP21 codifica a enzima 21-OH e se alternam em tanden com o pseudogene CYP21P, ambos apresentando 98% de homologia, favorecendo o emparelhamento desigual dos cromossomos durante a meiose, levando ao aparecimento de duplicações, deleções ou conversões destes genes. Estudos de mutagênes e in vitro permitiram quantificar a atividade enzimática de cada mutação e sua correlação com as diferentes formas clínicas da doença. O objetivo deste estudo foi delinear o perfil do complexo gênico 21-OH em famílias com pelo menos um membro portador de HAC por deficiência da 21-OH, determinar as freqüências de haplótipos com mutações de ponto no gene CYP21 e estabelecer uma correlação entre genótipo e fenótipo dos indivíduos afetados. Foram estudadas 50 famílias não correlacionadas, sendo 20 indivíduos portadores da forma clássica perdedora de sal (PS), 17 da forma clássica virilizante simples (VS) e 13 da forma não clássica (NC) de deficiência de 21-OH. Utilizamos DNA genômico para amplificação do gene CYP21 por PCR alelo-específico. Mutações foram identificadas em 93 alelos, sendo mais freqüentemente encontrada a mutação I172N (20,4%), seguida da V281L (18,2%), IVS2, A/C>G,-12 (Sp2) (14,0%) e R356W (6,5%), Q318X (1,1%), P30L (1,1%) e 706_713del8 (D8) (1,1%). Os genótipos foram divididos em grupos A, B e C, em ordem crescente da atividade enzimática, e foram comparados com as formas clínicas de HAC: PS, VS e NC, respectivamente. Em nossa amostragem, houve, ainda, uma forte correlação do genótipo com o fenótipo (100% para o C grupo, 100% para o B e 88,8% para o A). A freqüência de microconversões encontrada neste estudo foi semelhante à observada na população mundial e brasileiraAbstract: Congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency (CAH-21OHD) is one of the most common inborn metabolism errors. It presents a wide spectrum of clinical manifestations, varying from a severe form with prenatal virilization and neonatal dehydration to a mild form in which the signs appear around puberty onset. It presents recessive autosomal inheritance and occurs due to mutations in the CYP21 gene, which codifies the 21-hydroxylase enzyme. Mutations leading to less enzymatic activity are related to the classical form and those with more enzymatic activity with nonclassical form of the disease. We studied the frequency of the 7 most frequent point mutations reported in CYP21 gene in 50 families with CAH-21OHD, 21 with classic salt wasting patients (SW), 17 with classic simple virilizing patients (SV) and 13 with nonclassic form (NC). In addition, we correlated the phenotype with the genotype observed in all patients studied. We used genomic DNA to amplify CYP21 gene by allele-specific PCR. Mutations had been identified in 93 alleles. The more frequent mutation found was I172N (21.5%) followed by V281L (18.2%), IVS2, A/C>G,-12 (Sp2) (14.0%) and R356W (6.5%), Q318X (1.1%) and P30L (1.1%) and 706_713del8 (D8) (1.1%). The genotype was divided in groups A, B and C, in an increasing order of enzymatic activity. These three groups were compared to the SW, SV and NC forms, respectively. There was a strong correlation of phenotype with the genotype (100% for C group, 100% for B group and 88.8% for A group). In conclusion, the frequency of microconversions found in this study was similar to those observed in the worldwide and in a Brazilian sub populationMestradoCiencias BiomedicasMestre em Ciências Médica