Caracterização do gene BZ02H1 de Arabidopsis thaliana que codifica um fator de transcrição do tipo bZIP homologo ao fator O2 do milho : analise comparativa de sua especificidade de ligação ao DNA

Orientador : Michael Georges Albert VincentzDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: O gene Opaco2 (02) é um fator de regulação da transcrição do tipo bZIP envolvido no controle da síntese de proteínas de reserva no endosperma do milho. Um cDNA de Arabidopsis thaZiana que codifica uma proteína do tipo bZIP homóloga ao fator de transcrição 02 de milho denominado BZ02Hl masic Leucine Zipper Opaque2 Homologous) foi isolado e caracterizado. A seqüência do gene BZ02Hl foi identificada nos bancos de dados do projeto genoma de Arabidopsis thaZiana. O gene BZ02Hl é composto por sete exons e seis íntrons e está presente em cópia única no genoma de Arabidopsis thaZiana. A estrutura do gene BZ02Hl, assim como a alta similaridade entre as seqüências do domínio bZIP de BZ02Hl e 02 confirmaram que BZ02Hl pertence à Fanulia Multigênica de 02. Transcritos de RNA mensageiro de BZ02Hl foram detectados em todos os tecidos investigados e a incidência ou ausência de luz sobre as plantas jovens pareceu não afetar a expressão do gene. O domínio bZIP da proteína BZ02Hl foi produzido em E. coZi para determinar sua especificidade de ligação ao DNA. O domínio bZIP de BZ02Hl reconhece seqüências relacionadas ao sítio GCN4 como GLM (5'- TGACTA-3') e a seqüência palíndrome (5'-GACATGTC-3'), além dos motivos G-box e, menos intensamente, C-box. A especificidade de ligação do domínio bZIP de BZ02Hl foi comparada com a da proteína 02 de Coix e as diferenças encontradas foram discutidas.Abstract: The gene Opaque2 (02) encodes a bZIP transcription factor involved in storage protein synthesis control in maize endosperm. An Arabidopsis thaliana cDNA that encodes a bZIP protein homologous to the 02 transcription factor, named BZ02Hl (Basic Leucine Zipper Opaque2 Homologous) has been isolated and characterized. The BZ02Hl gene sequence was identified in the databases of the Arabidopsis thaZiana genome project. The BZ02Hl gene is composed of seven exons and six introns and is present as a single copy in the genome of Arabidopsis thaliana. The gene structure and the high sequence similarity of the bZIP domain shared by BZ02Hl and 02 deftned BZ02Hl as a member ofthe 02 multigene family. BZ02Hl mRNA was detected in alI tis sues analyzed, but no differences of the expression levels were observed when comparing young plants exposed to light or darkness. The bZIP domain ofBZ02Hl protein was expressed in E. coZi to begin the characterization of its DNA binding specificity. The bZIP domain of BZ02Hl binds to the GCN4-related DNA binding site sequences GLM (5'- TGACTA-3') and "palindrome" (5'-GACATGTC 3 '), as well as to the G-box and to a lesser extend to the C-box. The binding specificity of the BZ02Hl bZIP domain was compared to 02 Coix bZIP domain and the differences observed were discussed.MestradoMestre em Biologia Funcional e Molecula