Ultilização de culturas celulares para a respiração de picobirnavirus

Orientador: Maria Silvia Viccari GattiDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: O picobirnavírus (PBV) foi descrito por H.G. Pereira em amostras fecais de humanos no Brasil. Posteriormente, outros pesquisadores também detectaram o ácido nucléico dos PBV por eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA), que foi caracterizado como RNAds (fita dupla) e bissegmentado. Através de microscopia eletrônica foram detectadas partículas virais com aproximadamente 35 nm, que cossedimentavam em gradientes de cloreto de césio com RNAds dos PBV, em uma densidade de 1,38-1,40g/ml. Com relação a sua patogenicidade, alguns autores têm tentado associa-los a quadros de gastroenterites. Entre outras características, conhece-se pouco sobre a constituição protéica do vírus e seu mecanismo de replicação. Essa falta de informações se deve em parte à dificuldade em purificar esses vírus de material fecal, onde os mesmos se apresentam em baixas concentrações. Nosso trabalho objetivou adaptar esse vírus para cultivo em sistemas de culturas celulares. Para tal, foram utilizadas culturas primárias de rim de rato e de camundongo, assim como as linhagens estabelecidas em rim de rato sómios LLC-M¿K IND. 2¿ e MA104, e as linhagens intestinais humanas HT-29 e 'CA¿¿CO IND. 2¿. Na tentativa de promover a ativação viral, as amostras fecais positivas para PBV foram tratadas com as proteases tripsina e pancreatina para a infecção em células... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digitalAbstract: The picobirnavirus (PBV) was described by H.G. Pereira from human fecal samples in Brazil. Later, other researchers also detected the nucleic acid of PBV by polyacrylamide gel eletrophoresis (PAGE). The nucleic acid was identified as RNAds (double-stranded) and bisegmented. Electron microscopy showed viral particles of approximately 35nm which co-sedimented in cesium chloride gradients together with the RNAds, at a density of 1.38-1.40g/ml. In relation to its pathogenicity, some authors have tried to associate this virus with gastroenteritis. Among other characteristics, very little is know about its protein composition and its replication mechanism. This lack of information is due in part to the difficulty in purifying this virus from fecal material, where it appears in very low concentrations. Our work was focused on adapting this virus to growth in cell culture systems. For this study, primary cultures of rat and mouse kidney cells were used , as well as established strains of monkey LLC-M¿K IND. 2¿ and MA104, human intestine HT-29 and 'CA¿¿CO IND. 2¿ cells. To try to promote viral activation, PBV positive fecal samples were treated with proteases (trypsin and pancreatin). Periodic shaking, centrifugation or ¿roller¿ culture systems were used to promote cell-virus attachment. Of the 51 murine and swine fecal sample used, four (3 murine and 1 swine) were positive for PBV nucleic acid... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertationsMestradoMicrobiologiaMestre em Ciências Biológica